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序言胆管癌是一种起源于胆管上皮的恶性程度极高的肿瘤,其手术切除率低,术后复发率高,这往往与患者早期发生肿瘤转移相关。上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)被证实在肿瘤的侵袭转移过程中发挥重要作用,并且有多种生物分子及信号通路被证实能调节上皮间质转化过程,microRNA(miRNA)是一类短小的能在转录后水平调节目标基因表达的非编码RNA,目前miRNA及其下游调控基因的相关研究已是国内外研究热点。研究表明细胞外信号调节激酶(Extracellular signal-regulated kinase,ERK1/2)及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-AKT)信号通路在多种肿瘤的EMT的过程中发挥重要作用,而在胆管癌EMT过程中的研究报道尚少。本研究团队前期发现在1microRNA-21(miR-21)在胆管癌细胞中能通过调控EMT促进其侵袭与转移,本研究旨在探讨ERK1/2及PI3K-AKT信号通路在miR-21调控胆管癌细胞EMT中的作用。目的探索ERK/AKT信号通路在miR-21诱导胆管癌细胞EMT进程中的作用方法体外培养胆管癌细胞QBC939细胞,通过分别转染无关序列、miR-21 mimics和miR-21 inhibitor到细胞中,分为自然生长组(cell组)、无关序列组(21-NC组)、转染miR-21 mimics组(21-M组)以及转染miR-21 inhibitor组(21-Ι组),运用荧光定量PCR检测各组细胞miR-21及EMT标记分子N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的表达,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞PTEN(phosphatase and tensin homologue,磷酸酶张力蛋白同源物基因)、ERK (extracellular signal-regulated kinase,细胞外信号调节蛋白激酶)、AKT表达水平的变化；另取21-M组细胞进一步分为2组,分别加入AKT通路抑制剂(LY294002)和MAPK抑制剂(U0126)分别抑制ERK和AKT通路,分别为miR-21+LY294002组及]miR-21+U0126组,观察EMT相关分子的表达变化,采用Transwell实验检测各组胆管癌细胞迁移侵袭能力的变化。结果Cell组较21-NC组miR-21表达差异无统计学意义(P＞0.05),21-M组较cell组miR-21表达增高,而21-Ι组较cell组miR-21表达下降,差异具有统计学意义(P＜0.05)。同时PCR结果还显示Cell组与21-NC组E-cadherin、N-cadherin 及 Vimentin mRNA表达无明显差异(P＞0.05),21-M组较Cell组E-cadherin mRNA表达降低,N-cadherin及Vimentin mRNA表达增高,21-Ι组较Cell组E-cadherin mRNA表达增高,N-cadherin及Vimentin mRNA表达均降低,差异具有统计学意义(P＜0.05)；Western blot结果显示Cell组与21-NC组PTEN、ERK、p-ERK、AKT、p-AKT的相对表达量无明显差异(P＞0.05),21-M组较Cell组PTEN表达降低,而p-ERK、 p-AKT表达均增高,差异均有统计学意义(P＜0.05),21-Ι组较Cell组PTEN表达增高,而p-ERK、p-AKT表达均降低(P＜0.05)；miR-21+LY294002组及miR-21+U0126组较21-M组N-钙黏蛋白、波形蛋白表达降低而E-钙黏蛋白的表达增加,差异有统计学意义(P＜0.05)；Transwell侵袭及迁移实验证实miR-21+LY294002组及miR-21+U0126组较21-M组胆管癌细胞的迁移及侵袭细胞数明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论miR-21能下调E-cadherin和PTEN的表达而上调p-ERK、p-AKT、N-cadherin和Vimentin的表达；ERK及AKT信号通路参与了miR-21诱导胆管癌细胞EMT的过程,进而影响了胆管癌细胞的侵袭迁移能力。