阿尔茨海默病外周血潜在生物学指标的研究(抗Aβ抗体亲和力、血小板线粒体膜电位和CD62p)

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本课题研究了3个外周血潜在生物学指标:自身抗Aβ抗体亲和力,血小板线粒体膜电位(△Ψ m)和血小板CD62p。 1.自身抗Aβ抗体亲和力。Aβ42(或Aβ40)异常释放和沉积是AD形成和发展的关键。但多数研究发现AD患者和正常人血清中的Aβ水平无显著差异,单纯检测Aβ并不能作为AD的诊断指标,但可用于AD预测、病程发展和疗效观察。Du等人证实AD患者血清和脑脊液中的抗Aβ抗体水平降低,但仍有相当多的AD患者和健康人抗体水平相似,影响其作为AD辅助诊断指标的价值。抗体的生物活性不仅受抗体水平影响,还与亲和力有关。本课题调整研究思路,从抗Aβ抗体亲和力的全新角度探索其在AD发生发展中的意义。 2.血小板线粒体△Ψm。线粒体与AD的关系也是近来的研究热点,尤其是血小板线粒体的研究倍受关注。然而,对于代表血小板质量的线粒体△Ψm具体研究报道甚少。本课题从体外实验、动物和临床多个方面测定血小板线粒体△Ψm,希望有助于了解其在AD病因、发病机制中的作用。 3.血小板CD62p。AD患者存在血小板活化现象,血小板CD62p是目前最具有特征性的血小板活化的分子标志物。本课题比较AD组、血管性痴呆(VD)组和正常老年对照组血小板CD62p。拟明确血小板CD62p是否有助于AD患者的诊断或鉴别诊断。 在本论文中包括三大部分: 1.选择AD组、正常中年组和正常老年对照组各20例,通过间接EIISA法结合硫氰酸盐洗脱检测血清抗Aβ抗体相对亲和力。 2.荧光染料JC-1染色流式细胞术测定血小板线粒体△Ψm,分为三个小部分: 结论: 1.AD患者血清自身抗Ap抗体亲和力低于正常,多克隆抗Aβ抗体组成成份发生变化,低亲和力抗体亚群比例明显升高,我们提出假说:可能B细胞不完全免疫耐受在其中发挥着重要作用。 2.Tg2576鼠血小板线粒体△μm较正常明显下降;Aβ1-15肽疫苗免疫接种后抗Aβ抗体滴度明显升高,能有效清除Aβ,使得线粒体△Ψm恢复正常。 3.成功建立简单有效的Aβ损害血小板线粒体体外模型。不同浓度Aβ可导致血小板中线粒体数量减少和线粒体△Ψm下降,12.5μg/ml和25μg/ml Aβ对血小板的损害程度类似,但2.5μg/mlAβ的损害程度相对较轻。不同浓度雌激素(EB)对抗Aβ毒性作用均不明显,具体原因尚不清楚。可能由于血小板没有细胞核,没有雌激素核受体介导效果发挥作用,从而削弱其作用。 4.AD患者血小板线粒体△Ψm与正常老年人无明显统计学差异。与动物实验不一致原因可能有:口服药物、合并其它疾病干扰以及临床测定技术条件等,有必要进行更全面的临床研究。 5.AD组与VD组的CD62p平均表达率都较正常升高,但AD组与VD组的CD62p平均表达率无显著性差异,没有区分AD和VD的鉴别诊断价值。
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