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目的:探讨四氯化碳大鼠肝硬化形成期“病-方-证”相关的病理学基础。
方法:以50％的四氯化碳(CCI4)橄榄油溶液1mL·kg-1剂量腹腔注射，每周2次，共9周，制备大鼠肝硬化模型。第七周起大鼠随机分为模型对照组、一贯煎组、黄芪汤组、下瘀血汤组及茵陈蒿汤组干预治疗，用药同时继续造模至9周末处死全部大鼠取材，获取样本，观察以下几个部分:
1.肝功能指标、Hyp含量及各组大鼠肝组织病理学(HE＆ Sirus red)。
2.肝组织脂质过氧化指标检测:MDA含量、SOD活性、GSH含量；肝组织HSP70、HO-1、Prxd6、Transferrin、L-FABP蛋白表达:western blotting检测。
3.肝组织胶原合成与分解代谢指标检测:肝组织Col I检测:免疫荧光染色；α-SMA: western blotting、免疫组化检测:TIMP-1、TIMP-2、MMP-13、MMP-14蛋白表达:western blotting检测；MMP-2和MMP-9活性检测:采用明胶酶图法检测。
4.肝组织库普弗细胞功能检测:CD68蛋白表达:western blotting检测、免疫组化检测；TGF-β1、TNF-α蛋白表达:western blotting检测。
5.肝组织细胞凋亡指标检测:Fas、Cytochrome C、Bcl-2、Bax、Bcl-xL、Caspase-12、Caspase-3蛋白表达:western blotting检测；肝细胞凋亡原位检测:HEPPAR与TUNEL共定位。
6.肝组织再生指标检测:HGF-α、PCNA蛋白表达:western blotting方法检测。
7.正常组、模型组及各用药组代谢物质的差异。
结果
(1)与模型组比较，一贯煎与下瘀血汤显著改善肝组织病理、降低Hyp含量及改善肝功能；黄芪汤显著降低Hyp含量；茵陈蒿汤除降低ALT、AST活性外，无明显的药理学效应。
(2)与正常组相比，9周模型组大鼠MDA含量显著升高，一贯煎和下瘀血汤组MDA含量显著降低，并且一贯煎降低较下瘀血汤更明显，黄芪汤和菌陈蒿汤组无明显改变；9周模型组大鼠肝组织GSH含量、SOD活性显著降低，一贯煎组肝脏GSH含量、SOD活性显著升高，下瘀血汤组肝脏GSH含量显著升高，黄芪汤和茵陈蒿汤组无明显改变。与正常组相比，9周模型组大鼠肝组织HSP70、HO-1蛋白表达显著升高，Prxd6、Transferrin、L-FABP蛋白表达显著降低:一贯煎和下瘀血汤组HSP70、HO-1蛋白表达显著降低，并且一贯煎组HSP70蛋白表达降低较下瘀血汤更明显，Prxd6、Transferrin、L-FABP蛋白表达显著升高；黄芪汤和茵陈蒿汤组Prxd6、L-FABP蛋白表达显著升高，其余无明显变化。
(3)与正常组相比，9周模型组大鼠肝组织Col I、α-SMA、TGF-β1、TIMP-1、TIMP-2、MMP-13、MMP-14蛋白表达及MMP-2、MMP-9活性均显著升高；一贯煎和下瘀血汤均显著降低其表达，黄芪汤可显著降低Col1、α-SMA表达，而茵陈蒿汤组无明显改变。
(4)与正常组相比，9周模型组大鼠CD68、TGF-β1、TNF-α蛋白表达显著升高；一贯煎和下瘀血汤均显著降低其表达，并且下瘀血汤降低CD68蛋白表达作用较一贯煎更为显著，黄芪汤和茵陈蒿汤无明显改变。
(5)与正常组相比，9周模型组大鼠肝组织Fas、Bcl-2、Bax、Caspase-12蛋白表达显著升高，Bcl-xL、Cytochrome C蛋白表达无明显改变，其中Caspase-3蛋白表达3周时达最高峰，6周、9周有所降低，HEPPAR与TUNEL共染显示，3周肝细胞凋亡达最高峰，6周、9周也存在一定量的肝细胞凋亡。与模型组相比，一贯煎组Fas、Bcl-2、Bax、Caspase-12蛋白表达显著降低，Bcl-xL、Cytochrome C蛋白表达无明显改变，Caspase-3蛋白表达较9周模型组显著降低；下瘀血和茵陈蒿汤组Bcl-2、Bax显著降低，其余无明显变化；黄芪汤组均无明显改变。
(6)与正常组相比，9周模型组大鼠PCNA蛋白表达显著升高，HGF-α蛋白表达显著降低。与9周模型组比较，一贯煎和下瘀血汤均显著降低PCNA蛋白表达，升高HGF-α蛋白；黄芪汤与茵陈蒿汤均无明显改变。
(7)与正常组相比，9周模型组大鼠异亮氨酸、谷氨酸、亮氨酸、3-羟基苯乙酸、天冬氨酸、乙基丙二酸的含量显著降低，1，2-环丙基乙酰乙酸、高香草酸及肉桂酸含量升高。与9周模型组比较，一贯煎组大鼠氢化阿魏酸、4-羟基苯丙酸、1，2-环丙基乙酰乙酸及脯氨酸含量显著降低，下瘀血汤组1-哌啶羧酸、氢化阿魏酸、苯乙酸、甘氨酸、肉桂酸、4-羟基苯乙酸、1，2-环丙基乙酰乙酸含量降低；谷氨酸和3-羟基苯乙酸含量升高，黄芪汤与模型组相比较，氧化阿魏酸、4-羟基苯丙酸、苯乙酸、高香草酸、4-羟基苯乙酸及1，2-环丙基乙酰乙酸含量降低；3-羟基苯乙酸含量升高，茵陈蒿汤与模型组相比较，苯甲酸、甘氨酸、氢化阿魏酸、苯乙酸、4-羟基苯丙酸、乙基丙二酸、脯氨酸含量降低；3-羟基苯乙酸及马尿酸含量显著升高。
结论
(1)本实验再次证实，针对CCl4诱导的大鼠肝硬化形成期，不同治法的4首经典方剂(一贯煎、下瘀血汤、黄芪汤、茵陈蒿汤)中，一贯煎与下瘀血汤能够有效抑制其肝硬化的形成，有显著的抗肝损伤作用，茵陈蒿汤对该模型则无显著的药效学效应。
(2)一贯煎和下瘀血汤均可抑制CCl4诱导大鼠肝硬化的胶原合成与促进胶原分解代谢，并促进肝细胞再生。其中“补养肝阴”一贯煎的抗脂质过氧化和抑制肝细胞凋亡，保护肝脏实质细胞的药理特点突出；而“活血化瘀”的下瘀血汤有调控库普弗细胞功能，减少炎症因子及促纤维化因子释放的药理特点。
(3) CCl4诱导的大鼠肝硬化存在显著的代谢产物谱异常，一贯煎、下瘀血、黄芪汤和茵陈蒿汤都有一定的纠正作用，其代谢组学信息变化的意义尚有待进一步挖掘。
(4)根据中医学“以方测证”的分析，CCl4大鼠肝硬化形成期模型的主要证型应属“肝阴虚损、瘀血阻络”。