论文部分内容阅读
第一部分，成人急性淋巴细胞白血病分型探讨
目的：研究成人急性淋巴细胞白血病(ALL)生物学特征，分析ALLWHO2008年分类变化。
方法：应用流式细胞仪、R显带常规核型分析法、RT-PCR技术检测初诊成人ALL的免疫分型、细胞/分子生物学特征。
结果：①共412例初诊成人ALL患者，男性239例，女性173例。免疫表型可分析病例410例，B系357例，T系53例。B系的髓系抗原表达比例高于T系。髓系抗原阳性与CD34表达相关。②Ph+/BCR-ABL+ALL(Ph+ALL)患者93例，主要见于CD1O+ALL，与高WBC、髓系抗原及CD34表达相关。ALL伴MLL重排(MLL+)患者12例，主要见于早期前B-ALL。③据WHO2008年分类标准，可分析病例299例，其中，B-ALL伴重现性细胞遗传学异常126例，包括B-ALL伴t(9;22)(q34;q11.2)或BCR-ABL(Ph+ALL)92例，MLL+ALL10例，超二倍体11例，亚二倍体9例，E2A-PBX+3例，TEL-AMLI+1例。各组间在CD34及髓系抗原表达存在统计学差异。B-ALL非特指型120例。将Ph+ALL、MLL+ALL，亚二倍体及E2A-PBX阳性患者作为一组，与其他患者相比，前者年龄、WBC、HGB、外周血幼稚细胞比例、乳酸脱氢酶值均较高。
结论：需将免疫表型、细胞/分子遗传学结合以明确ALL诊断。ALL的WHO2008年分类据细胞遗传学对B-ALL作了更详细分类。
第二部分，PTEN与其假基因PTENP1在急性白血病中的相关性研究
目的：本研究旨在探讨抑癌基因PTEN（10号染色体上磷酸酶与张力蛋白同源缺失性基因）与其假基因PTENP1在急性白血病中的表达情况及两者之间的相关性，研究急性白血病细胞系中PTENP1对PTEN的调控作用。
方法:应用实时定量RT-PCR的方法检测138例初诊急性白血病(AL)患者及15例正常对照骨髓细胞中PTEN与其假基因PTENP1mRNA的表达水平，并分析其与急性白血病各临床特征相关性。构建PTENP13UTR(ψ3UTR)的慢病毒载体pCDH1-ψ3UTR-GFP，磷酸钙共沉淀法转染293T细胞，所得病毒原液感染HL-60细胞系和K562细胞系，流式分选得到混合克隆。分别提取pCDH1-GFP（对照组）和pCDH1-ψ3UTR-GFP混合克隆细胞总RNA，逆转录为cDNA，RealtimePCR检测两组不同克隆mRNA表达变化，通过WesternBlot检测两组不同克隆蛋白表达变化，MTT法检测细胞增殖变化。
结果：与正常对照组[PTEN及PTENP1分别为3.53(1.02-9.60)和6.26(2.66-10.26)]相比，急性白血病患者中PTEN[1.65（-1.61-6.67）]及PTENP1[2.72（-0.33-10.44）]mRNA水平均明显降低(P＜0.05)。相关性分析显示，PTEN与PTENP1mRNA表达水平呈正相关性，相关系数r=0.724(P＜0.05)；PTEN及PTENP1表达与患者性别无明显相关性。按NCCN2011年AML治疗指南中的预后分类标准，PTENP1表达阳性AML组患者中，预后良好组34例，预后中等组58例，预后不良组16例，各组之间PTEN及PTENP1表达水平无明显差异。按FAB分型标准，AML患者中包括M01例，M15例，M232例，M317例，M410例，M537例，M66例，各分型之间PTEN及PTENP1表达水平无明显差异。ALL患者包括18例B系ALL和5例T系ALL，两组之间PTEN及PTENP1表达水平无明显差异。AML患者[1.43（-1.61-6.67）]与ALL[2.01(0.57-4.08)]患者相比，PTEN表达水平较低(P＜0.05)，PTENP1表达无明显差异。pCDH1-GFP和pCDH1-ψ3UTR-GFP病毒原液感染HL-60细胞系，与对照组(pCDH1-GFP)相比，感染pCDH1-ψ3UTR-GFP的HL-60细胞系和K562细胞系PTENP1mRNA水平明显升高，PTENmRNA水平亦有升高，但PTEN蛋白无明显变化，细胞增殖亦无明显变化。
结论：与正常人相比，急性白血病患者中PTEN及PTENP1mRNA表达水平降低，二者之间的表达存在相关性。因PTEN假基因不表达蛋白，提示PTENP1可能在mRNA水平对PTEN的表达具有调控作用。PTEN蛋白的表达受若干机制的调节，明确其中决定性调节机制，将会为肿瘤的临床治疗提供治疗靶点。
第三部，分急性白血病APE1的表达及活性测定
目的：本研究旨在探讨APE1(A Pendonucl ease1)在急性白血病中的表达情况，并测定初诊急性白血病(AL)中APE1内切酶活性。
方法：应用免疫组化技术检测158例初诊AL患者及8例正常对照骨髓细胞中APE1蛋白的表达水平，应用BCA法测定AL患者中总蛋白定量，应用寡聚核苷酸探针测定了APE1蛋白的酶切活性。
结果：我们应用免疫组化技术检测了158例初诊AL患者及8例正常对照的APE1蛋白的表达，发现AL患者骨髓细胞中APE1表达主要定位于胞核，AL患者组APE1表达明显高于正常对照组(P＜0.05)。我们通过BCA法测定了69例急性白血病病人和26例正常对照外周血白细胞中APE1的定量，应用寡聚核苷酸探针测定了APE1蛋白的酶切活性。而后将APE1的酶切活性比总蛋白定量即可反映不同病人白细胞中APE1酶活性的高低。发现急性白血病患者组白细胞中APE1内切酶活性明显高于正常对照组，差异有统计学意义，P＜0.05。
结论：与正常人相比，急性白血病患者APE1蛋白表达水平较高。AL患者中APE1活性亦较正常对照组升高。因APE1蛋白水平的升高可能与化疗耐药有关，故降低APE1的表达及活性将为肿瘤的临床治疗提供治疗靶点。