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L(+)酒石酸是一种天然有机酸,是食品工业和制药工业等行业的重要原料。利用诺卡氏菌产生的环氧琥珀酸水解酶将化学合成的环氧琥珀酸转化为L(+)酒石酸是近年开发的一种L(+)酒石酸生产方法。本研究的主要内容是将5L发酵罐中培养得到的诺卡氏菌细胞用κ-卡拉胶固定化,用于将环氧琥珀酸转成产物L(+)酒石酸。
环氧琥珀酸水解酶是一种胞内酶,在5L发酵罐中通过控制诱导物环氧琥珀酸的流加来提高其比酶活,可以达到748u/g。κ-卡拉胶包埋菌体,最适的胶浓度为2%,菌体浓度为20%,酶活回收率可以达到80%。温度对环氧琥珀酸水解酶稳定性有很大影响,添加保护剂可减少温度引起的酶活损失。高浓度的底物会对转化反应产生抑制作用,游离细胞的Km为0.234M,抑制常数K1为0.22M,Vmax为39.1g/l·h;固定化细胞则分别为0.31M、0.21M、26.2g/l·h。游离细胞的底物反应最适pH为8.0,固定化细胞的最适pH为8.5。30℃下0.2M的底物浓度下,摇瓶中连续转化30批酶活没有明显损失;1.0M的底物浓度下,可以连续转化10批。