【摘 要】
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次氯酸是细胞中广泛存在的一种活性氧,由体内的H2O2和Cl-在髓过氧化物酶的催化下反应产生,在机体对抗病原体入侵的自身免疫反应中扮演重要角色,其正常产生有助于维持机体正常
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次氯酸是细胞中广泛存在的一种活性氧,由体内的H2O2和Cl-在髓过氧化物酶的催化下反应产生,在机体对抗病原体入侵的自身免疫反应中扮演重要角色,其正常产生有助于维持机体正常的生理活动,而如果产生过量则会使生物分子氧化而造成组织损伤,甚至引发许多疾病。人体内次氯酸含量少,且反应活性高,致使其在体内存在时间短,这增加了体内次氯酸检测的难度。目前相比于其他活性氧,对次氯酸在癌症病发中所扮演角色的认知还较少。尽管在检测次氯酸探针的设计方面已取得了很大进展,但是仍存在一些问题,比如:探针的响应时间长、量子产率低等。因此,设计响应快速、选择性好、灵敏度高的探针仍有很大需求。本论文设计合成了基于氟硼二吡咯的超快速响应且可用于检测细胞中内源性次氯酸的荧光探针,具体内容如下:本文基于C=N异构化机理及次氯酸可特异性地氧化C=N基团这一性质,以氟硼二吡咯(BODIPY)为荧光团,通过醛基化的BODIPY与对甲基苯磺酰肼的缩合反应合成了一种turn-on型荧光探针,表征结果表明所合成探针分子的结构正确。接着对该探针体外分析性能进行了探究,实验结果表明该探针可快速响应ClO-,响应时间约为0.2 s,在识别ClO-后吸收峰发生蓝移,体系颜色由粉色变为绿色,这一过程可用肉眼观察到,并伴随着体系荧光的显著恢复。在0-15μM的范围内,探针的荧光强度与ClO-浓度呈良好的线性关系,检测限可达4.27 nM。在4-13的广泛pH范围内,该探针对ClO-有很好的响应,说明其可用于生理pH环境。选择性和干扰实验表明该探针有良好的选择性和抗干扰能力。对探针B-Ts与ClO-反应产物的表征结果表明ClO-将C=N氧化为醛基,从而使荧光恢复。鉴于探针良好的体外分析性能,最后,将其用于细胞中ClO-的检测。MTT实验结果表明探针的细胞毒性小,可用于活细胞中;细胞实验结果表明探针可成功用于正常细胞和癌细胞中内源性和外源性ClO-的检测。
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