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研究目的:本研究通过检测健康者、慢乙肝及慢乙肝肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者尿液中MicroRNAs(miRNAs)的表达，旨在发现慢乙肝及其不同证候患者尿液中的特异性miRNAs，评估其诊断性及与临床指标的相关性，通过生物信息学分析初步探讨这些miRNAs在慢乙肝中可能的作用，为慢乙肝辨证分型提供生物学标志物和客观化依据。 研究方法:1.本研究总共收集108例慢乙肝患者的尿液及患者的临床和证候信息，采用临床方法进行证候分类;2.采用miRNAs表达谱芯片技术，检测健康者（5例）、慢乙肝（6例，包括3例肝胆湿热证和3例肝郁脾虚证）患者尿液中miRNAs表达谱，分析差异表达的miRNAs;3.采用实时定量RT-PCR(qRT-PCR)技术，检测慢乙肝（100例）及慢乙肝肝胆湿热证（50例）和肝郁脾虚证（50例）患者尿液中部分差异表达的miRNAs，并观察相关miRNAs在肝细胞株中的表达情况;4.对慢乙肝病证差异表达的miRNAs与临床指标进行相关性分析，并进行潜在靶基因的预测、GO和pathway分析。 研究结果:1.miRNAs芯片结果显示，与健康人比较，慢乙肝患者尿液中miRNAs存在差异表达，其中14条miRNAs表达呈高表达(fold change＞2，p＜0.05)，47条miRNAs表达呈低表达(fold change＞2，p＜0.05);与肝郁脾虚证患者比较，肝胆湿热证患者有9条miRNAs呈高表达(fold change＞1.5，p＜0.05)，1条miRNA呈低表达(fold change＞1.5，p＜0.05)。 2.qRT-PCR结果显示，与健康人（35例）比较，慢乙肝（100例）患者尿液中miR-92b-3p、miR-770-5p、miR-5196-5p和miR-7855-5p呈显著高表达(p＜0.0001);与肝郁脾虚证（50例）患者比较，肝胆湿热证（50例）患者尿液中miR-483-3p和miR-4700-3p呈显著高表达(p＜0.05)，miR-4745-5p呈显著低表达(p＜0.05)。 3.ROC曲线显示，miR-92b-3p、miR-770-5p、miR-5196-5p和miR-7855-5p 4.对区分慢乙肝和健康者极具诊断意义(AUC=0.8900，0.9270，0.7603，0.8169); miR-483-3p、miR-4700-3p、miR-4745-5p和以上三个差异表达miRNAs的联合对于鉴别慢乙肝肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者具有一定的诊断价值(AUC=0.6490，0.7946，0.6168，0.8016)。miR-92b-3p和miR-7855-5p与总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL-C)呈现显著的负相关(r=-0.263，p=0.008;r=0.241，p=0.016; r=-0.228，p=0.023;r=-0.258，p=0.01);miR-770-5p与临床指标α2球蛋白和总蛋白(TP)呈负相关(r=-0.222，p=0.030; r=-0.339，p=0.001)，与单核细胞呈现显著的正相关性（r=0.235，p=0.020），与单核细胞呈现显著的正相关性(r=0.235，p=0.020)。miR-92b-3p和miR-7855-5p与肝损伤和肝硬化呈显著相关性(p=0.039，p=0.032; p=0.050，p=0.009)。miR-92b-3p、miR-770-5p、miR-7855-5p和miR-770-5p在HepG2.2.15细胞呈低表达。 5.采用生物信息学方法发现病证差异表达miRNAs所调控的潜在靶基因，GO大都与转录调控、信号转导、转录、细胞粘附和蛋白磷酸化等相关;pathway大都与癌症相关、MAPK、肌动蛋白细胞骨架、焦点粘连和内吞作用等通路有关。 结论: 1.慢乙肝患者尿液中miRNAs存在异常表达，miR-92b-3p、miR-770-5p、miR-5196-5p和miR-7855-5p呈显著高表达(p＜0.001);尿液miRNAs可作为慢乙肝患者的辅助诊断，对于丰富慢乙肝的病理机制等，具有重要的学术意义和应用前景。 2.慢乙肝肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者尿液中miRNAs存在差异表达，miR-483-3p、miR-4700-3p和miR-4745-5p为慢乙肝肝胆湿热证和肝郁脾虚证的标志性分子，这些miRNAs分别通过调控其相应的靶基因而影响证候的发生发展。 3.MiR-92b-3p、miR-770-5p和miR-7855-5p与患者肝功指标密切相关，可能在乙肝病毒感染过程中与参与机体免疫应答等相关进程。