【摘 要】
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目的:食物中毒事件时有发生,金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)是引起食物中毒的常见致病菌.该菌产生的葡萄球菌肠毒素(SE)可引起中毒症状,造成呕吐、腹泻及休克等.从某种意义上讲,
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目的:食物中毒事件时有发生,金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)是引起食物中毒的常见致病菌.该菌产生的葡萄球菌肠毒素(SE)可引起中毒症状,造成呕吐、腹泻及休克等.从某种意义上讲,对食物中毒病原的诊断,检测葡萄球菌肠毒素比检测金葡菌本身更为重要,而寻找快速、敏感、特异的肠毒素诊断方法是一项亟待解决的研究课题.为了适应食物中毒这类突发事件,及时给临床治疗提供准确的病原学诊断,建立一种快速检测肠毒素的方法成为当务之急,也是本次研究课题的目的.方法:葡萄球菌肠毒素根据血清型分类可分成A、B、C、D、E、G、H、I、J型.本研究针对9型葡萄球菌肠毒素基因设计了特异性PCR引物,分别检查各型肠毒素的基因表达情况.将金葡菌10倍稀释成一系列浓度进行灵敏度实验.应用9对特异性引物分别对8种人类其他致病菌包括肺炎链球菌、溶血性链球菌、大肠杆菌、变形杆菌、志贺氏菌、沙门氏菌、副溶血弧菌、霍乱弧菌进行PCR扩增,以金葡菌为阳性对照进行特异性实验.另外,在实际应用中,本研究尝试直接将中毒食物样品经均质器粉碎混匀,取上层匀浆液提取DNA,进行金葡菌各型肠毒素基因的PCR扩增,同时采用美国国标方法即多参数免疫分析仪(Vidas)对葡萄球菌肠毒素进行测定.按照世界卫生组织(WHO)推荐的K-B法对分1泌不同型肠毒素的金葡菌进行了药敏实验.结论:设计的9对引物成功的扩增了金葡菌产生的各型肠毒素的基因,具有很强的特异性;利用9对引物应用PCR法成功地从食物中毒样品中直接扩增出了肠毒素基因,证明该方法具有很高的灵敏度;该方法有可能成为食物中毒等突发公共卫生事件中病原学诊断的一种实用、理想的方法.
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