【摘 要】
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为了逆肿瘤多药耐药基因(MDR1)产物P-170gp所介导的多药耐药性,针对人类MDR1mRNA第Ⅷ外显子附近第179及196密码子的GUC序列,按照"锤头结构"模型设计、合成了两个核酶179MDR1R
【出 处】
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南京铁道医学院 东南大学医学院 东南大学
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为了逆肿瘤多药耐药基因(MDR1)产物P-170gp所介导的多药耐药性,针对人类MDR1mRNA第Ⅷ外显子附近第179及196密码子的GUC序列,按照"锤头结构"模型设计、合成了两个核酶179MDR1Ribozyme(179RZ)和196MDR1 Ribozyme(196RZ),并定向克隆入载体PGEM-3Zf(+) 中.MDR1 mRNA从肝癌多药耐药细胞株SMMC-772/DOX中提取,RT-PCR法扩增出约269bp大小的特异性cDNA片段,采用SmaRT法克隆入载体PGEM-3Zf(+)中.重组质粒通过DNA测序证实插入片断的序列正确后,在体外转录成RNA.在生理条件下,两个核酶均能定点切割MDR1mRNA成 两段特定大小的片段.核酶的切割效率与作用时间、核酶与底物的比率、Mg<2+>浓度有关 ,196RZ的切割活性高于179RZ.该实验为利用核酶技术逆转肿瘤抗药性提供了现实可能性.
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