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【目的】本研究旨在应用开环聚合法制备PLGA-PEG-PLGA三嵌体温敏水凝胶并讨论其理化性质。利用萘莫司他甲磺酸盐结合温敏凝胶PLGA-PEG-PLGA,制作出载药的温敏凝胶复合体。通过讨论其在体外凝胶温度、溶液流变学、药物释放等指标研究其理化性质,并通过细胞毒性实验评价其对动物体内实验的安全性,为将来在动物体内应用载药温敏凝胶修复脊髓损伤提供理论依据。【方法】1.温敏凝胶溶液理化性质测定经开环聚合法制得PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶,将其冻干后加入到双蒸水中,并在4℃孵育24小时得到20%的未载药温敏凝胶溶液。将其置于水浴内,每隔1℃逐渐升温,而后倒置180°,观察每个温度下液体表面的流动情况。采用高级旋转流变系统(Advanced Rotary Rheological System,ARES)探究流变学特点,并在透视式电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM)下观察其形态。2.载药温敏凝胶溶液理化性质测定将萘莫司他甲磺酸(Nafamostat Mesilate,NM)加入到20%的未载药温敏凝胶溶液中,配置成含萘莫司他甲磺酸3mg/ml的载药温敏凝胶溶液,在4℃孵育24小时得到20%的载药温敏凝胶溶液。将其置于水浴内,每隔1℃逐渐升温,而后倒置180°,观察每个温度下液体表面的流动情况。采用ARES探究流变学特点,并在TEM下观察药物在温敏凝胶的分布情况。3.药物缓释测试将载药温敏凝胶溶液加入圆底离心管内,将其置于37℃恒温摇床内,孵育12小时,得到凝胶化的载药温敏凝胶块。然后开始震荡,分别在15 min,30 min,45 min,1 h,3 h,6 h,12 h,24 h,72 h,120 h,168 h,240 h的时间点取出溶液。将取出的溶液稀释10倍,在紫外线吸收光谱中取最高峰值处的吸光度代如标准曲线中,得到其浓度,进而计算出累积释放率。4.载药温敏凝胶细胞毒性的测定PC12细胞培养,添加药物,通过CCK8检测细胞存活率,并利用Graphpad prism7.0做出柱形图。【结果】1.未载药的温敏凝胶溶液呈澄清溶液状态,凝胶温度测试显示20%的未载药温敏胶溶液的凝胶温度范围为32-42℃。动态流变学分析显示未载药温敏凝胶储能模量G’和损耗模量G”相交点大约在31℃,未载药温敏凝胶的粘度最高值大约在36℃。并且在透射电镜下可看到一个个类似球型的胶束或胶束团,直径在10-30mm之间不等。2.载药温敏凝胶呈较混浊溶液状态,凝胶温度测试显示20%的载药温敏胶溶液的凝胶温度范围为35-56℃。动态流变学分析显示载药的温敏凝胶储能模量G’和损耗模量G”相交点大约在34℃,载药温敏凝胶的粘度最高值大约在40℃左右。并且载药温敏水凝胶在透射镜下可看到药物颗粒均匀分散在凝胶胶束或胶束团中间。3.在载药温敏凝胶中,萘莫司他甲磺酸盐的累积释放率在第1天时约为58%,第5天时约为83%,第10天时约为92%。4.载药温敏凝胶组中PC12细胞的生存率与单纯药物组、未载药温敏凝胶组和空白对照组差异无统计学意义。【结论】1.本实验成功制备了NM-PLGA-PEG-PLGA载药温敏水凝胶,并证明其具有温敏特性。通过温度测定,动态流变学分析表明载药温敏水凝胶在人体正常体温下可形成凝胶状态。通过电镜观察,该载药温敏凝胶中萘莫司他甲磺酸盐可均匀分布在温敏水凝胶中。2.药物缓释测试表明在10天内在载药温敏凝胶中萘莫司他甲磺酸可缓慢持续性释放。3.细胞毒性分析表明该载药温敏水凝胶对体内细胞具有安全性,可以进一步进行体内实验