鸭TLR2基因多态性及其与免疫性能的相关研究

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本研究以鸭TLR2基因为候选基因,利用生物信息学方法,克隆了鸭TLR2(Toll like receptor2)基因的编码全序列,在群体范围内进行了PCR-SSCP分析,并对鸭TLR2单核苷酸多态性及其与部分免疫性能指标之间进行关联分析,筛选与鸭的早期免疫性状相关的分析标记,为鸭的分子标记辅助育种提供理论基础。一、鸭TLR2基因的克隆及其生物信息学分析本实验克隆得到的鸭TLR2基因编码全序列,全长2383bp,由一个开放阅读框组成,编码793个氨基酸,分子量为90416.6Da,等电点为7.08。鸭TLR2基因与人、牛、猪、老鼠和鸡TLR2基因序列的比对结果显示,鸭TLR2基因与鸡TLR2基因序列同源性最高为80.0%,人(63.5%)次之,顺次为猪(61.4%),鼠(60.0%)和牛(58.4%)。蛋白的2、3级结构预测显示,该序列内存在5次跨膜分子组成TLR超家族的基序。鸭推定TLR2蛋白的三维结构以人TLR2蛋白为模型,相似度为77.397%。二、鸭TLR2PCR-SSCP检测及其多态与免疫性能的关联分析试验采用PCR-SSCP的方法对所克隆的鸭TLR2基因部分编码序列进行了SNPs检测。试验设计的4对引物中,在M2和M4两对引物扩展序列中检测到了多态性,均表现为2种基因型。鸭群体中SNPM2以等位基因A为主,等位基因频率达到0.8335,等位基因B频率仅为0.1665。SNPM4以等位基因C为主,等位基因频率达到0.8415,等位基因D频率仅为0.1585。x2适合性检验结果表明,鸭群体在SNPM2和SNPM4均处于平衡状态(P>0.05)。SNPM2和SNPM4的多态信息含量分别为0.239和0.231,属低度多态。最小二乘分析和显著性检验表明:SNPsM2和SNPsM4两个变异位点各形成的两种基因型个体的免疫器官指数之间差异都不显著(P>0.05)。对缙云麻鸭TLR2基因编码全序列部分片段不同基因型与免疫细胞因子进行最小二乘均值多重比较,结果表明SNPsM2变异位点所形成的AA、AB两种基因型个体的IFN-γ和IL-2之间差异不显著(P>0.05)。SNPsM4变异位点所形成的CC、CD基因型个体的IFN-γ之间差异不显著(P>0.05),但二者的IL-2差异显著(P<0.05),CC基因型的IL-2的含量显著高于CD基因型的IL-2的含量。可初步考虑将TLR2基因作为影响蛋鸭免疫性状的候选基因。
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