产碱性蛋白酶菌株Bacillus pumilus Zk202的选育与酶学性质研究

来源 :甘肃农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:fanke26
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
碱性蛋白酶在食品、洗涤及制革等行业中有着广泛的用途。本论文从盐碱地土壤中分离筛选出一株产碱性蛋白酶的野生菌株Zk202,并进行了菌株的鉴定、诱变提高酶活、发酵条件优化、粗酶的提纯和酶学性质的初步研究。研究结果如下:1.从盐碱地土样中分离到一株耐盐耐碱的芽孢杆菌,其可在NaCl浓度为5%~10%的培养基中生长良好,耐碱性达到pH值为13,经形态学观察、生理生化特征研究及16S rDNA序列比对,结果表明该菌属芽孢杆菌属(Bacillus sp.)中短小芽孢杆菌的新的亚种,命名为耐盐碱短小芽孢杆菌Zk202。2.通过紫外线诱变和化学诱变进行复合诱变,结果表明紫外线照射80 sec,DES浓度为2%、处理时间为40 min,菌株产蛋白酶效果最佳。44 h的发酵液酶活力由81 U/ml提高至321 U/ml。3.通过单因子试验和正交试验,在摇瓶培养条件下对菌株的碳源、氮源、金属离子、培养温度、接种量等产酶条件进行了优化。得到了菌株的最适产酶条件为:培养基初始pH 9.0,葡萄糖浓度为1.5%,蛋白胨浓度为1.5%,钙离子浓度为0.01%,接种量2%,培养温度为36℃,发酵时间为45 h。在此条件下,碱性蛋白酶的酶活力可达383 U/ml。4.粗酶液通过硫酸铵盐析沉淀、透析除盐、凝胶柱层析等步骤,对碱性蛋白酶进行了纯化,纯化后的样品经SDS-PAGE得单一酶带。其比活力达到了954 U/mg,纯化了6.13倍,酶活力回收率为27.6 %。5.通过SDS-PAGE对酶的分子量进行了测定,测得该酶分子量为25000 Da。当以酪蛋白为底物时,其最适作用pH为11,最适作用温度为50℃。
其他文献
本文在超循环理论的基础上,分析企业循环系统的形成过程及企业循环的基本模式和基本要素。基于企业循环基本模式,构建企业循环的数学模型。利用数学工具对企业循环的控制效用
<正>据ABI 2015年第二季度(MD-IOE-104)万物网(Internet of Everything)市场跟踪报告预测,2020年物联网互连设备数量将超过450亿个,其中采用蓝牙的物联网互连设备至少140亿个
针对我国建筑企业安全管理还不够规范,安全管理水平比较低等问题,使企业能够清楚认识安全管理现状和明确改进目标,在分析组织项目管理成熟度模型OPM3和项目管理成熟度模型K-P
新课程的实施,教育理念的转变,素质教育的推行,要求我们的教学要和生活相联系。结合生活实际中的事件和现象来学习地理,会为地理理论找到合适的载体,有利于学生的理解,也更能
研究不同贮藏温度、不同含水量处理对辣椒花粉生活力变化及田间授粉效果的影响,以探究不同贮藏条件下辣椒花粉的贮藏能力。结果表明:辣椒花粉生活力随着贮藏时间的延长而降低