益肾养阴合剂对MRL/lpr小鼠免疫调节机制的研究

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目的:探讨益肾养阴合剂对MRL/lpr小鼠中的CD4+、CD8+、IFN-γ、IL-l0的影响。揭示益肾养阴合剂对MRL/lpr小鼠免疫紊乱发挥疗效作用的调节,为益肾养阴合剂治疗系统红斑狼疮提供了实验基础。方法:将C57BL/6雄性小鼠分两组,第1组生理盐水对照;第2组正常中药组(益肾养阴合剂)。再将MRL/1pr雄性小鼠随机分为4组:第3组为生理盐水对照组;第4组为中药组(益肾养阴合剂);第5组为中西药组(益肾养阴合剂+醋酸泼尼松片);第6组为西药组(醋酸泼尼松片)。各组小鼠均为10只。予以每日灌胃连续治疗4周。4周后处死,取各组小鼠(每组取5只)新鲜脾脏组织进行研磨、淋巴细胞分离后,用流式细胞术检测CD4+、CD8+细胞比例;再取余下各组5只小鼠新鲜脾脏组织为两部分,一部分用ELISA法检测组织IL-10、IFN-γ浓度;另一部分运用RT-PCR实验检测IL-10、IFN-γ mRNA含量。结果:1.6组小鼠脾脏淋巴细胞的CD4+细胞数在正常小鼠C57BL/6,及正常小鼠C57BL/6给予中药处理后的小鼠中CD4+细胞无明显变化,而各个MRL/lpr小鼠组别的脾脏淋巴细胞较正常小鼠中CD4+细胞数均较低(p=0.000,p<0.05),MRL/lpr小鼠给予相应的治疗处理后,各个治疗组的MRL/lpr小鼠CD4+细胞数均有所升高(p=0.000,p<0.05),其中中药联合激素组的CD4+细胞数升高最为明显(p=0.000,p<0.05);2.脾脏淋巴细胞CD8+细胞数在6组间比较正常小鼠C57BL/6小鼠生理盐水对照组和中药处理组之间无明显差异,各组MRL/1pr小鼠的脾脏淋巴细胞CD8+细胞数与C57BL/6小鼠生理盐水对照组比较有显著增多(p=0.001,p<0.05),给予治疗后,各个治疗组与MRL/lpr生理盐水对照组相比,中药组(p=0.016,p<0.05)、中药联合激素组(p=0.048,p<0.05)、激素组(p=0.009,p<0.05)的CD8+细胞数均有所减少,而各治疗组之间无明显差异;3.各组小鼠脾脏淋巴细胞的CD4+/CD8+细胞数比值,在6组间C57BL/6小鼠生理盐水对照组和中药处理组之间无明显差异,MRL/lpr小鼠生理盐水对照组的CD4+/CD8+比值最低(p=0.000,p<0.05),分别给予中药(p=0.000,p<0.05)、中药联合激素(p=0.000,p<0.05)、激素(p=0.000,p<0.05)治疗后,CD4+/CD8+细胞比例有所升高,中药联合激素组的CD4+/CD8+比值增高最为显著;4.6组间比较正常C57BL/6小鼠脾脏组织中IL-10表达最低(p=0.000,p<0.05),正常小鼠给予中药处理后IL-10表达无明显变化。MRL/1pr+生理盐水组的IL-10表达最高(p=0.000,p<0.05),MRL/1pr小鼠给予中药(p=0.000,p<0.05)、中药联合激素(p=0.000,p<0.05)、激素(p=0.000,p<0.05)治疗后,IL-10表达均有明显降低,中药联合激素处理组的IL-10表达减少最为明显。6组间比较正常小鼠C57BL/6脾脏组织中IFN-γ表达较高,单纯给予中药后IFN-γ无明显变化,而各个MRL/lpr小鼠脾脏组织中IFN-γ与正常小鼠比较表达均明显降低(p=0.000,p<0.05),经给予中药(p=0.000,p<0.05)、中药联合激素(p=0.000,p<0.05)、激素(p=0.000,p<0.05)治疗后,IFN-γ表达均有明显增多。其中中药联合激素组的IFN-γ表达增多最为明显。IL-10mRNA、IFN-γ mRNA的表达6组间比较差异性与蛋白变化(ELISA结果)一致。结论:1.益肾养阴合剂对MRL/1pr小鼠免疫紊乱的治疗作用可能与其通过调节CD4+、CD8+细胞数及CD4+/CD8+的比例有关。2.益肾养阴合剂对MRL/1pr小鼠IL-10有下调作用而对IFN-γ有一定的上调作用,其中中药加激素组最为明显;在检测MRL/1pr小鼠的IFN-γ、IL-10mRNA表达是其结果与ELISA检测结果基本保持一致,说明益肾养阴合剂对MRL/1pr小鼠中细胞因子紊乱具有调节作用。3.从整体上实验观察结果得出,益肾养阴合剂可通过对CD4+、CD8+、IFN-γ、IL-10的调节缓解MRL/1pr小鼠病情,且治疗调节了CD4+/CD8+比例,说明益肾养阴合剂对调节MRL/1pr小鼠免疫紊乱具有一定疗效。
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