论文部分内容阅读
杆状病毒表达载体系统(BEVS)是基因工程最重要的表达系统之一,与其他表达系统相比,它具有安全、高效、大容量等众多优越性,已经被用于表达了多种外源蛋白。但目前还没有可调控表达外源基因的重组杆状病毒系统的报道,构建这样一个表达系统,对于某些特殊基因的表达和生产,以及基因功能研究具有重要意义。
大肠杆菌E.coliTet阻遏因子(Tetrepressor)具有负调节四环素抗性操纵子的表达,TetR蛋白与四环素具有很高的亲和性。在没有四环素存在的时候,TetR与tet操纵因子序列(TetO)结合而阻断四环素抗性基因的表达。当有四环素存在的时候,TetR对TetO的阻遏解除,下游转录得以正常进行。
本课题在Bac-to-Bac重组杆状病毒构建系统的基础上,首先构建了在病毒多角体启动子后带有tet阻遏蛋白结合序列(响应元件)的重组杆状病毒,和两种用不同启动子在昆虫细胞中表达阻遏蛋白的质粒。通过质粒转染和病毒转染细胞后,在诱导物强力霉素存在或不存在的情况下检测报道基因的表达,初步发现该系统对昆虫细胞中外源基因的表达水平有一定的调节作用。
在此基础上构建了两株用不同启动子表达tet阻遏蛋白,并同时带有tet响应元件及报道基因表达系统的完整的tet调控系统的重组杆状病毒,构成可调控表达的重组杆状病毒。该重组病毒感染昆虫Sf21细胞后,观察到诱导物的存在对表达水平有一定的正调节作用。
本研究的初步结果为进一步构建具有更好的调控作用的重组表达效果的重组杆状病毒提供了基础。