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目的：通过检测增殖细胞核抗原，了解体外培养的兔角膜缘干细胞增力。探讨神经生长因子(NGF)促进兔角膜缘干细胞的增殖作用及最佳有效浓度。方法：取成年大耳白兔角膜缘组织，应用组织块消化培养法进行原代培养，获得细胞单层并观察细胞形态学变化。采用鼠PCNA单克隆抗体对第六代角膜缘干细胞进行PCNA免疫组化检测。取第二代生长状态良好的干细胞，以5×103个/ml细胞浓度接种于96孔细胞培养板中，依次加入1-200ng/ml不同浓度的NGF，培养48小时后，采用MTT法测定细胞增殖情况。结果：PCNA免疫组化结果显示：角膜缘干细胞在传第六代时仍保持较强的增殖力，经DAB显色后，细胞核染色阳性，呈现黄褐色。10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml不同浓度组的NGF均有促进角膜缘干细胞的增殖作用，与对照组比较差异均有显著性(P＜0.01)。1ng/ml组与对照组、50ng/ml组与200ng/ml组比较差异均无显著性(P＞0.05)。结论：应用组织块消化培养法可以成功获得原代和传代培养的角膜缘干细胞，并具有较强的增殖力，适合于进行干细胞移植治疗角膜缘功能衰竭和作为药物筛选的细胞模型。本实验证实NGF可有效促进培养角膜缘干细胞的生长，培养的适宜浓度为10-100ng/ml，为角膜缘干细胞移植患者术后及角膜外伤或溃疡时局部应用NGF提供了理论依据。