甲状腺相关性眼病(TAO)静脉血单个核细胞差异表达microRNA的初步筛选

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wobuwanlebuxingma
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目的:  甲状腺相关性眼病(TAO)的发病机制复杂且尚未明确。本文旨在以免疫学机制作为切入口,初步筛选出甲状腺相关性眼病患病组与正常对照组表达差异的microRNA,为进一步研究与甲状腺相关性眼病相关的特异性microRNA以及功能探索打下基础,也为寻找临床上甲状腺相关性眼病的特异诊断指标,以及治疗新靶点提供新的角度。  方法:  收集正常对照组、TAO静止期组和TAO急性期组各3例外周静脉血,提取人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC),提取RNA做新一代高通量microRNA测序,构建TAO及正常对照组的microRNA表达图谱并分析,筛选出不同组别差异表达的microRNA,选取TAO静止期组与正常对照组、TAO急性期组与正常对照组之间共同差异表达明显的4个microRNA。然后利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qrt-PCR)技术,在正常对照组、TAO静止期组和TAO急性期组各5例的扩大样本中验证上述筛选出的microRNA。  结果:  1.microRNA测序结果:TAO静止期组与正常对照组相比,T检验p值<0.05,且相差倍数>2的microRNA共有17个,分别为:hsa-miR-3155a、hsa-miR-6718-5p、hsa-miR-939-3p、hsa-miR-653、hsa-miR-4433-5p、hsa-miR-378a-3p、hsa-miR-3160-3p、hsa-miR-1298、hsa-miR-4646-3p、hsa-miR-6503-3p、hsa-miR-378c、hsa-miR-18b-3p、hsa-miR-2467-5p、hsa-miR-548c-5p、hsa-miR-19a-5p、 hsa-miR-30c-2-3p、hsa-miR-3136-5p、hsa-miR-629-3p。  TAO急性期组与正常对照组相比,T检验p值<0.05,且相差倍数>2的microRNA共有34个,分别为:hsa-miR-6515-3p、hsa-miR-1306-5p、hsa-miR-4797-3p、hsa-miR-1306-3p、hsa-miR-424-3p、hsa-miR-5001-5p、hsa-miR-6718-5p、hsa-miR-4640-3p、hsa-miR-4680-3p、hsa-miR-3615、hsa-miR-379-3p、hsa-miR-450a-3p、hsa-miR-4635、hsa-miR-99a-5p、hsa-miR-490-3p、 hsa-miR-642b-3p、hsa-miR-548c-5p、hsa-miR-455-5p、hsa-miR-4761-3p、hsa-miR-6513-5p、hsa-miR-382-3p、hsa-miR-215、hsa-miR-19a-5p、hsa-miR-30c-2-3p、hsa-miR-30c-1-3p、hsa-miR-940、hsa-miR-146a-3p、hsa-miR-659-3p、hsa-miR-199a-3p、hsa-miR-125b-1-3p、hsa-miR-1299、hsa-miR-655、hsa-miR-199b-3p、hsa-miR-933、hsa-miR-1197。  其中两部分对照共同差异表达的为hsa-miR-19a-5p、hsa-miR-30c-2-3p、hsa-miR-548c-5p、hsa-miR-6718-5p这4个,且与正常对照组相比,TAO静止期组和TAO急性期组均呈现明显的上调趋势。  2.用实时荧光定量PCR验证的结果:TAO静止期组与正常对照组相比,上述筛选出的4个microRNA检测表达p值均<0.05,且差异倍数>2,呈上调趋势。TAO急性期组与正常对照组相比,上述筛选出的4个microRNA检测表达亦为p值均<0.05,且相差倍数>2,呈上调趋势。验证结果与测序结果基本相符。  结论:  1.筛选出了TAO静止期组与正常对照组相比差异表达明显的microRNA共17个,TAO急性期组与正常对照组相比差异表达明显的microRNA共34个,共同表达差异的则有4个,均呈上调趋势。  2.用qrt-PCR技术,验证了两个TAO患病组与正常对照组共同差异表达的4个microRNA,差异表达明显,上调趋势与测序结果相符。
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