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目的辛伐他汀作为竞争性3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(3-hydroxy-3-methylglutaric acid,HMG-Co A)还原酶抑制剂,在以往的大量实验已经被证明具有诱导成骨分化作用。本实验选用辛伐他汀(Simvastatin,SIM)体外给药,对大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化中晚期的影响进行研究。探讨在成骨诱导成分环境下,辛伐他汀对BMSCs在成骨分化中晚期作用的最佳起效时间和p38MAPK通路的影响。方法SPF级雌性SD大鼠20只,应用脱颈法处死大鼠,在无菌条件下取双侧股骨和胫骨,全骨髓培养法进行原代和传代培养。原代细胞传代后,根据实验需要随机分为对照组(Control medium group,CM):完全培养基培养;辛伐他汀组(Simvastatin medium group,SIM):含有10-7mol/L辛伐他汀的完全培养基;成骨诱导培养基组(Osteoinduce medium group,OM):含有10mmol/Lβ甘油磷酸钠和50μg/ml抗坏血酸的成骨诱导培养基培养;辛伐他汀和成骨诱导培养基组(Simvastatin and Osteoinduce medium group,OM+SIM):终浓度为10-7 mol/L的辛伐他汀和成骨诱导培养基。阻断剂组(SB203580+Simvastatin+Osteoinduce medium group group,SB+OM+SIM):先用p38MAPK通路阻断剂SB203580干预30min后,加入诱导培养基和浓度为10-7 mol/L的辛伐他汀诱导。选取CM组和SIM组MTT法检测第2d、3d、4d、5d和6d细胞活性;选取OM组和OM+SIM组,提取第7天和第14天细胞,ELISA法检测ALP表达,OM组和OM+SIM组于传代后第21天和第28天给药1h、12h、24h后,提取蛋白和RNA检测OCN的蛋白和RNA表达水平,确定药物作用最佳时间后,检测该时间点OM组、OM+SIM组和SB+OM+SIM组p38MAPK、p-p38MAPK蛋白的表达。结果1 MTT检测:10-7 mol/L浓度的辛伐他汀对细胞增殖和细胞活性无影响,差异无统计学意义(P>0.05)。2 ELISA:第7天各组ALP表达量最高(P<0.05),而OM+SIM组显著高于OM组,统计学分析有显著性差异(P<0.05)。3 Real-time PCR检测:第21、28天各组OCN m RNA在给药后第12h表达量最高(P<0.05)且OM+SIM组明显高于OM组,统计学分析具有显著性差异(P<0.05)。4 Western blot检测:第21、28天各组OCN在给药后12h表达最高,统计学分析具有显著性差异(P<0.05),OM+SIM组明显高于OM组(P<0.05)。药物干预12h后OM+SIM+SB组p-p38明显低于其他两组(P<0.05),OM+SIM组p-p38表达高于OM组,统计学分析具有显著性差异(P<0.05)。结论1 10-7 mol/L浓度的辛伐他汀对细胞增殖和细胞活性无影响。2第7d时ALP表达最高且辛伐他汀对ALP表达有明显诱导作用。3辛伐他汀药物起效的最佳时间为给药后12h。4辛伐他汀可以增加OCN蛋白、m RNA和p-p38蛋白表达量。