论文部分内容阅读
癌症是严重危害人类健康的重大疾病之一。和手术、化疗、放疗等传统治疗方法相比,新型治疗手段发挥越来越重要的作用。其中,基因治疗和光疗以其安全低毒、高效可控的特点,具有广阔的应用前景。研究表明,多种癌细胞内均有高表达的miRNA-21,可以利用其抑制剂mi RNA-21i下调表达,调节细胞凋亡信号通路,促进凋亡,抑制增殖、侵袭和转移。光动力治疗通过ROS能够诱导凋亡,同时光热治疗提高肿瘤部位局部温度,也会有效消融肿瘤。因此基因-光疗的联合,能够更有效地杀伤肿瘤。为实现基因-光疗的联合,使药物在溶酶体酸性环境下释放并发挥作用,实现时空可控的精准治疗,本课题以纳米氧化石墨烯为骨架,经过逐层修饰,设计酸响应型、具有电荷反转功能化的多功能载体,同时负载ICG、mi RNA-21i,构建共转运复合物,实现药物的同时运输、酸响应性释放、有序作用和时空可控的联合治疗。以纳米氧化石墨烯为基底,将通过化学反应藕联多聚赖氨酸(PLL),进而与柠康酐(Cit)形成酰胺键,使纳米载体带负电,进一步,通过静电吸附作用树状大分子(PAMAM),得到复合纳米载体GO-PLL-Cit-PAMAM。利用Zeta电位、动态光散射(DLS)、原子力显微镜(AFM)、透射电镜(TEM)等方法表征,表明复合纳米载体卷曲成球,粒径约150 nm,厚度约4 nm,热重分析(TGA)PLL与PAMAM分别占36%和25%,琼脂糖凝胶电泳证明miRNA-21i可以被PAMAM完全吸附,且免受血清和DNase I的降解。光谱分析结果显示ICG载药率为75%,有酸响应型释放能力,同时具有良好的光热转换效率和荧光成像效果。体外细胞水平研究结果表明该纳米复合物细胞内吞有时间依赖性,8 h可以有效进入肿瘤细胞,并在36 h发生溶酶体逃逸,释放到细胞质中,下调内源性高表达的miRNA-21,ICG可以充分发挥光疗作用,而两种方法共同作用显示联合的抗癌效率(细胞存活率仅为17.33%),活体水平抗肿瘤实验亦证实其明显抑制乳腺癌的生长,且具有良好的生物安全性。本课题的研究结果表明,酸敏感型纳米共转运复合体GPCP/miRNA-21i/ICG可以实现肿瘤基因-光疗联合治疗,在抗癌领域具有巨大的应用潜能。