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病毒入侵宿主细胞后,宿主细胞可通过模式识别受体侦测到病毒核酸序列,产生干扰素、趋化因子和促炎因子等天然免疫反应进而限制病毒的感染,其中干扰素在限制病毒复制过程起着重要作用;先前研究表明在PCV2亚临床感染猪只体内可以看到干扰素升高的现象,但是关于PCV2病毒感染后是如何调控干扰素生成的,又是通过和哪些模式识别受体结合的,目前尚不清楚。所以本试验通过建立PCV2亚临床感染模型,选择既是天然免疫细胞又是PCV2感染靶细胞的猪肺泡巨噬细胞为研究对象,探究PCV2感染仔猪干扰素的变化及其调控途径,进一步补充和完善PCV2致病机制。选取15头血清中猪圆环病毒和猪蓝耳病毒抗体和抗原均为阴性的30日龄断奶仔猪,适应性饲养7天以消除应激,然后随机分成三组(每组5头):阴性对照Od组,PCV2感染14 d组和感染28 d组。对照组仔猪每头滴鼻和肌肉注射各2 mL PBS,试验组仔猪每头滴鼻和肌肉注射各2 mL 5×105TCID50 · mL-1 PCV2悬液。接种后将试验组和对照组仔猪处死,收集血浆,采集肺脏和淋巴结,并分离肺泡巨噬细胞,部分肺脏和淋巴结固定于福尔马林溶液,其余部分-80℃冰箱保存备用。直肠温度检测;肉眼镜检各组猪只淋巴结和肺脏的病理变化;阻断ELISA方法检测第0、7、14、21和28 d血清中猪圆环病毒的抗体;普通PCR方法检测肺脏和淋巴结中猪圆环病毒抗原;荧光定量绝对定量方法检测肺脏和淋巴结中PCV2病毒拷贝数含量;荧光定量PCR方法检测肺泡肺泡巨噬细胞中干扰素、细胞模式识别受体和模式识别受体接头分子以及诱导干扰素生成的核转录调节因子mRNA水平;Western blot方法检测细胞模式识别受体TLR9、RIG-1、MDA-5、DAI和接头分子MyD88、MAVS以及转录因子IRF3和IRF7蛋白水平。结果表明,试验过程中对照组和试验组猪只直肠温度没有明显差异,温度正常;感染14 d组和28 d组淋巴结有轻微肿大,其它脏器形态结构均无明显变化,显微镜下观察发现各组淋巴结和肺脏均没有明显病理变化;0 d对照组血清抗体阻断率≤30%,判断为抗体阴性;PCV2感染后7 d到28 d血清中抗体阻断率均≥38%,判断为抗体阳性;感染组抗体阻断率与对照组相比显著升高,并且从7d到28d抗体含量呈逐步升高的趋势(P<0.05);对照组抗原为阴性,试验组为阳性;试验组中每50 mg肺脏和淋巴结中在14 d PCV2病毒DNA量平均值分别为7.0×103 copies和1.1×104copies,在 28d 分别为 1.9×104copies 和 8.5×104copies,对照组没有检出;以上实验结果表明实验猪只处于PCV2亚临床感染状态。IFN-β和IFN-γ mRNA转录水平在14 d和28 d均显著高于对照组(P<0.05);模式识别受体RIG-1、MDA-5、TLR4和TLR9mRNA转录水平在14d和28d显著升高(P<0.05);DAI基因转录水平在14 d显著升高(P<0.05),但在28d迅速下降;TLR3、TLR7和TLR8mRNA转录水平无明显变化;接头分子MAVS、MyD88和转录因子IRF3和IRF7mRNA转录水平在14 d 和 28 d 均显著高于对照组(P<0.05);TLR9、RIG-1、DAI、MyD88、MAVS、IRF3和IRF7蛋白水平在14d和28d显著升高(P<0.05);MDA-5的蛋白水平在14d和28 d没有明显差异;以上实验结果表明,PCV2亚临床感染仔猪后导致肺泡巨噬细胞内IFN-β和IFN-y的表达量上调,其上调和PCV2激活的TLR4/TLR9/MyD88和RIG-1/DAI/MAVS/IRF3/7 信号通路有关。