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月经血鉴定在法医学血痕鉴定中具有重要意义，尤其在性侵犯案件中，常需要鉴定血迹的来源以明确案件性质，辨别事件真伪，为法庭科学提供科学的证据。目前法医学中有关月经血的鉴定方法主要有两种，一是特征性的细胞检查，一是纤溶蛋白酶检测。但是这两种方法在指标的特异性、检测的灵敏度方面均具有局限性，不适于陈旧、微量的法医学检材的检测。
为寻找月经血鉴定的特异性指标，发展月经血鉴定的新方法，本研究拟从基因表达的组织特异性入手，选择与子宫内膜及月经血特异性相关的mRNA(MMP7、MMP11)及microRNA(miR412)标记，提取总RNA后逆转录，应用特异性引物及TaqMan探针，以实时定量PCR(real time-quantitive PCR，RT-qPCR)的方法，检测MMP7、MMP11 mRNA及miR412在健康个体月经血痕、外周血痕、精斑、阴道拭子以及癌症患者外周血痕中的表达，探讨MMP7、MMP11 mRNA及miR412在月经血中的表达特异性，建立月经血鉴定的RNA分析方法。同时，应用终点PCR(endpoint PCR)方法，建立月经血与血痕、精斑等三种法医学常见体液斑的特异性mRNA标记的荧光标记复合检测系统。
本研究共收集24名健康个体2个周期的月经血痕样本共108份，精斑10例，外周血痕10例，阴道拭子10例，癌症患者外周血痕10例。
首先应用TRIzol法及硅胶柱纯化法提取月经血痕的总RNA，并比较两种方法的提取效果。结果显示两种方法提取的总RNA出现较清晰的28S、18S两条带，提取的RNA量均足以满足逆转录PCR(reverse transcription PCR，RT-PCR)实验。
提取RNA后进行逆转录，用实时定量PCR技术检测MMP7和MMP11mRNA标记在月经血和其他体液斑中的表达差异。首先在公共数据库GeneBank中查找各mRNA标记的全长序列，应用Primer express3.0软件设计特异性引物/探针。采用ABI公司7500型荧光定量仪进行实时定量PCR检验。结果发现MMP7、MMP11mRNA在月经血中的表达高于其在其他体液斑中的表达。根据不同体液斑中的MMP7和MMP11 mRNA的CT值及△CT值的差别，订立月经血鉴定的标准，即当△CT≤8，且目的基因的CT值≤35时，视为阳性月经血样本。根据此标准可以鉴定出82％以上的月经血样本。
为评估MMP7和MMP11 mRNA在月经血中的表达稳定性，对同一个体不同行经日的84份样本及不同周期的40份样本进行检测分析，发现MMP7和MMP11mRNA在行经前四天样本中的表达较为一致，但高于其在行经第五、六天样本中的表达。两个周期的月经血样本各基因的检测结果重复性较好。
对RT-qPCR方法检测mRNA标记鉴定月经血的法医学应用价值进行评估，发现MMP7和MMP11 mRNA鉴定阳性样本的最小RNA模板量均为0.25ng。对室温放置1天～3年的月经血样本，MMP7 mRNA的最长鉴定时限可达3年，而MMP11mRNA的最长鉴定时限＜6个月。
为研究miR412用于月经血鉴定的法医学应用价值，选择ABI公司miR412引物探针试剂盒(TaqMan(R)MicroRNA Assay)，以RT-qPCR方法检测46份月经血样本和6份外周血痕、6份精斑、6份阴道拭子样本。发现miR412在月经血痕中的表达低于精斑和阴道拭子中的表达，但高于外周血痕中的表达。根据miR412在月经血痕、外周血痕中的CT值和△CT值差异，订立月经血区别于外周血痕的参考标准，即△CT≤8且miR412的CT值≤37时，在月经血和外周血之间倾向于肯定月经血样本。根据此标准可以鉴定出91％以上的月经血样本。
为评估miR412在月经血中的表达稳定性，对同一周期不同行经日的46份样本及不同周期的14份样本进行检测分析，发现miR412在行经第一天至第五天的表达呈逐渐增高趋势。两个周期的月经血样本各基因的检测结果重复性较好。
对RT-qPCR方法检测microRNA标记鉴定月经血的法医学应用价值进行评估，发现miR412鉴定阳性样本的最小RNA模板量为lng。室温放置1天～3年月经血样本均有miR412的检出，且CT值未见有明显变化。△CT值和CT值均在指定的鉴定标准以内。
为建立月经血痕、血痕和精斑各自的特异性mRNA标记(MMP7、MMP11；HBA;KLK3，PRM2)和一个内参基因(ACTB)的终点PCR复合检测体系，将6个基因的正向引物的5’端标记FAM荧光，通过正交试验优化PCR反应体系的组成和热循环参数，并根据聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果调整复合扩增体系中各基因的引物浓度，初步建立体液斑鉴定的六重复合扩增体系。用毛细管电泳检测该6个标记在月经血痕、血痕和精斑样本中的复合扩增产物，获得清晰结果。
为观察复合扩增对群体月经血检测的稳定性，对24个个体同一个周期不同行经日的样本进行批量检测，发现其阳性率稍低于RT-qPCR方法检测的阳性率。对终点PCR复合检测mRNA标记鉴定月经血的法医学应用价值进行评估，发现与RT-qPCR检测结果较为一致。
结论 mRNA标记(MMP7、MMP11)在月经血中的表达较其他组织高，可以较好的区分月经血和其他体液斑。而microRNA标记(miR412)的表达特异性则不如mRNA标记，不能区分精斑和阴道液，但仍可区分月经血和外周血。本实验建立的RT-qPCR法检测MMP7、MMP11 mRNA、miR412具有较好的灵敏度，适于法医学微量检材的鉴定要求。建立的三种体液斑(月经血痕、血痕、精斑)6个基因的复合扩增体系稳定，可用于法医学体液斑确证实验。本实验研究数据表明mRNA标记(MMP7、MMP11)及microRNA标记(miR412)在月经血斑痕中随时间的降解速率缓慢，可以用于法医学鉴定。