论文部分内容阅读
目的:细胞因子是由细胞分泌并且在细胞中发挥连接作用的蛋白质,细胞因子是通过高亲和力的特异性的结合到细胞表面实现的。它可以触发细胞信号传导从而调整细胞激活,增殖,分化和生存。很多细胞因子是通过JAK-STAT途径实现这一作用的,它先和近膜区的因子受体结合。哺乳动物的JAK家族有四位成员JAK1,JAK2,JAK3 ,TYK2,它是许多造血生长因子的信转导机制,通过它造血因子调控细胞生长增殖分化和凋亡,在白血病中它通常是持续激活的。SHP-1和SOCS是调节JAK-STAT的主要因子,含有SH2结构域的SHP-1主要在造血细胞表达,它可以使酪氨酸脱磷酸化发挥抑癌基因作用。它负性调节造血细胞的分化,生长,和增殖通过使酪氨酸脱磷酸化减少或终止活化的信号传导或启动凋亡。作为JAK-STAT通道的负性调节因子在白血病中,它的表达是降低的。曾被称为JAB,SSI,和CIS的SOCS是通过抑制JAK-STAT通道发挥抑制作用的蛋白质。到目前为止,CIS、SOCS1、SOCS2、SOCS3的抑制作用已经研究的很清楚,但是SOCS4–SOCS7还不是很清楚。SOCS1和SOCS3通过SH2磷酸酪氨酸结构域与JakS相互作用,SOCS1可以强有力的抑制JAK的催化活性,SOCS3次之,SOCS蛋白寿命短暂并且作用相似,它们可能通过结合靶受体,或其他因子发挥降解作用。SOCS蛋白有相同的结构,该家族N末端内含有一个SH2区域,同源性约23 %～58 % ,C末端内含有保守性极高的CH区,即SOCS box。生物学和基因学研究显示SOCS家族在终止细胞因子和生长因子中发挥重要作用。本研究拟通过观察在各型白血病和白血病的不同阶段SHP-1,TYK2,SOCS6,SOCS7的表达情况,初步探讨TYK2与SHP-1、SOCS6、SOCS7基因在白血病中的表达变化及其临床意义。方法:研究对象包括62例急性白血病患者(包括36例初治AL患者、6例复发患者和20例缓解期患者),20例慢性粒细胞白血病患者(包括12名慢性期病人,8名加速期病人),30名健康人为正常对照。将其分为初治急性白血病组、缓解组、复发组、慢性粒细胞白血病组和正常对照组。应用半定量逆转录-聚合酶链反应( simi-quantity reverse tanscription-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测各组TYK2,SHP-1,SOCS6,SOCS7的mRNA水平。1采用RT-PCR分析TYK2,SHP-1,SOCS6,SOCS7mRNA在AL病人中的表达。1.1 TYK2 mRNA在初治AL患者阳性率为83% (30/36),表达水平为0.3735,表达水平明显高于正常对照组(阳性率为33%,平均水平为0.079),有显著性差异,P<0.05;AML、ALL两组之间无统计学差异(P>0.05)。复发组表达率为100%,平均表达水平0.4765,高于正常对照组(P<0.05),与初治AL组相比无显著性(P>0.05)。在20例缓解组中有12例表达阳性,平均表达水平为0.2920,阳性率为60%,与正常对照组比较结果有显著性(P<0.05)。1.2 SHP-1 mRNA在AL时基因平均表达水平为0.101,阳性率为25%,表达水平明显低于正常对照组(阳性率为100%,平均水平为3.121),有显著性差异,P<0.05;AML组(表达率38%,平均表达水平0.197)与ALL组(表达率0%,平均表达水平0)均低于正常对照组。AML、ALL两组之间表达水平有统计学差异(P<0,05)。复发组(表达率0%,平均表达水平0)低于正常对照组(P<0.05)与初治AL组相比有显著性(P<0.05)。SHP-1 mRNA在缓解组平均表达水平为0.301,阳性率为60%,表达水平与正常对照组比较有统计学差异(P<0.05)。1.3 SOCS6 mRNA在初治AL患者阳性率为91.7% (33/36),表达水平为0.9817,表达水平明显高于正常对照组(阳性率为57%,平均水平为0.4576),有显著性差异,P<0.05;AML、ALL两组之间无统计学差异(P>0.05)。复发组表达率为83.3%,平均表达水平1.2276,高于正常对照组(P<0.05),与初治AL组相比无显著性(P>0.05)。在缓解组中平均表达水平为0.529385,阳性率为75%(15/20),与正常对照组比较结果无显著性(P>0.05)。1.4 SOCS7mRNA在AL组患者中阳性率为75%(27/36)表达水平为0.379,低于正常对照组(阳性率为96.7%,平均水平为1.0264)有显著性差异,P<0.05;AML、ALL两组之间无统计学差异(P>0.05)。复发组表达率为16.7%,平均表达水平0.1403,低于正常对照组(P<0.05)。与初治AL组相比无显著性(P>0.05)。缓解组阳性率为85%(17/20),平均表达水平为0.3927,与正常对照组比较结果有显著性差异(P<0.05)。2.分析TYK2,SHP-1,SOCS6,SOCS7mRNA在CML病人中的表达。TYK2在CML-CP病人中mRNA表达阳性率58.3%(7/12),平均表达水平0.3132,高于正常对照组,有统计学意义(P<0.05)。在加速期中,TYK2mRNA平均表达水平(0.3334)与正常对照组比较有统计学差异(P<0.05), SHP-1 mRNA在CML-CP中表达率33.3%(4/12),平均表达水平0.156,低于正常对照组(P<0.05);在加速期中SHP-1 mRNA的表达更低(0%,0),与正常对照组存在统计学差异(P<0.05)。SOCS6 mRNA在CML-CP中阳性率66.7%(8/12),平均表达水平0.8816,高于正常对照组,有统计学意义(P<0.05)。在加速期中,SOCS6mRNA表达水平(100%,0.9533),与正常对照组比较有统计学差异(P<0.05); SOCS7在CML-CP中表达率58.3%(7/12),平均表达水平0.4974,低于正常对照组(P<0.05);在8例加速期患者中,SOCS7mRNA表达更低(62.5%,0.4109),与正常对照组比较有统计学差异(P<0.05);但慢性期和加速期之间无统计学意义。3 SHP-1+组缓解率为77.78%(7/9),SHP-1-组缓解率为16.00%(4/25)。SHP-1-组的缓解率低于SHP-1+组,进行χ2检验分析,差别有显著性(χ2=11.540,P=0.001)。TYK2+组的缓解率为40%(12/30),明显低于TYK2-组(100%,3/3),两组之间有差异(χ2=3.96,P=0.047)。SOCS6+组的缓解率为76%(25/33),明显高于SOCS6-组(0/1),两组之间有差异(χ2=5.303,P=0.021)。SOCS7+组的缓解率为31%(10/33),明显低于SOCS7-的缓解率为100%,两组之间有差异(χ2=6.032,P=0.014)。SHP-1+ TYK2-组缓解率100%(4/4)明显高于SHP-1- TYK2+组缓解率(16%,4/25),两组之间有差异(χ2=12.18,P=0.001);TYK2- SOCS6+组缓解率100%(4/4)明显高于TYK2+ SOCS6-组缓解率(0%,0/1),两组之间有差异(χ2=5.0,P=0.025);SHP-1+ SOCS7-组缓解率100%(3/3)明显高于SHP-1- SOCS7+组缓解率(0%,0/21)两组之间有差异(χ2=24,P=0.001),其他组因标本数量少未做统计学处理。结论1 TYK2在急性白血病中表达明显高于正常对照组,在缓解后表达降低但仍高于正常对照组.TYK2表达高者缓解率低也说明了JAK-STAT通道的激活在急性白血病的发生发展中的作用。2 SHP-1在正常时表达最高,急性白血病时最低,缓解时稍有增加,且SHP-1表达高者缓解率高。SHP-1阳性TYK2阴性患者缓解率明显高于SHP-1阴性TYK2阳性患者,表明SHP-1作为负性调节因子调控JAK-STAT通道。3 SOCS6在正常人中普遍表达,但在急性白血病时表达最高,SOCS6表达高者缓解率高,SOCS6阴性TYK2阳性患者缓解率明显低于SOCS6阴性TYK2阳性患者. 4 SOCS7在正常人中表达最高,在急性白血病时表达最低,SHP-1阳性SOCS7阴性组缓解率明显高于SHP-1阴性SOCS7阳性组,两组之间有差异。5在慢性粒细胞白血病慢性期患者SOCS7,SHP-1mRNA水平低于正常对照,有统计学意义;TYK2,SOCS6mRNA水平高于正常对照,也有统计学意义。在急变期SOCS7、SHP-1mRNA表达水平比慢性期还低与正常对照比较有统计学意义,TYK2、SOCS6mRNA表达比慢性期还高与正常对照比较也有统计学意义。由于标本数量少未能发现慢性期和加速期存在统计学差异。