己酮可可碱对小鼠精子体外获能、顶体反应的影响

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目的:研究己酮可可碱(Pentoxifylline,PF)对昆白小鼠精子获能和顶体反应(Acrosome Reaction,AR)的作用。方法和结果:实验一:分别以0mg/ml、0.125mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、4mg/ml的PF和10ug/ml的孕酮(Progesterone,P4)作用精子30分钟,然后用考马斯亮蓝(Coomassie brilliant blue,CBB)染色法检测各组精子的AR率并进行统计分析。研究上述浓度的PF和P4诱导精子发生顶体反应的作用,分析PF与精子顶体反应的量效关系。结果表明所有的PF处理组和P4处理组,与对照组(PF0.0-30)的AR率都没有显著差异(P>0.05)。实验二:用上述浓度梯度的PF作用精子30分钟,再用10μg/ml P4处理精子10分钟以诱导获能精子发生顶体反应。对各组的AR率进行统计分析,研究不同浓度的PF对P4诱导小鼠精子发生顶体反应的作用,分析PF与小鼠精子获能的量效关系。结果显示0.125mg/ml PF处理组的AR率与对照组(PF0.0-30;P4-10)的AR率没有显著差异(P>0.05),而0.25mg/ml PF处理组的AR率与对照组有显著差异(P<0.05),1mg/ml及以上浓度的PF处理组的AR率与对照组有极显著差异(P<0.01)。实验三:先使小鼠精子获能培养60分钟,再以同上浓度梯度的PF、10μg/ml的P4、PF和P4同时作用小鼠精子10分钟。统计分析各组的AR率,研究不同浓度的PF对获能精子发生顶体反应的作用,分析PF与已获能精子发生顶体反应的量效关系,分析PF与P4对已获能精子发生顶体反应是否有协同作用。结果显示0.5mg/ml及以下浓度的PF处理组的AR率与对照组(PF0.0-10)的AR率没有显著差异(P>0.05),1mg/ml及以上浓度的PF处理组的AR率与对照组有显著差异(P<0.05),P4处理组及PF和P4同时处理组的AR率与对照组有极显著差异(P<0.01),P4处理组与PF和P4同时处理组的AR率没有显著差异(P>0.05)。实验四:用能促进获能精子发生顶体反应的最低浓度的PF作用精子,分别检测作用0分钟、20分钟、40分钟、60分钟、80分钟、100分钟时精子的AR率并进行统计分析,分析PF与小鼠精子AR的时效关系。结果发现PF处理组和对照组(M16)在0分钟、20分钟、40分钟时的AR率并没有显著差别(P>0.05),而在60分钟以后PF处理组的AR率明显高于对照组(P<0.05)。结论:1.PF可促进小鼠精子获能,可以使其获能完成时间提前,PF作用的最低有效浓度是0.25mg/ml。2.低浓度(≤0.5mg/ml)的PF不诱导小鼠获能精子发生顶体反应,高浓度(≥1mg/ml)的PF诱导小鼠获能精子发生顶体反应。3.PF和P4对小鼠获能精子发生顶体反应不存在协同作用。4.PF诱导小鼠精子顶体反应的起始时间为60分钟。
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