【摘 要】
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根据大肠杆菌O157的Z4182基因设计一对引物,在其5′端分别加入NcoI、XhoI酶切位点,同样利用聚合酶链反应（PCR）对上述各菌株的DNA序列进行扩增,发现所有大肠杆菌O157及1株大肠杆
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根据大肠杆菌O157的Z4182基因设计一对引物,在其5′端分别加入NcoI、XhoI酶切位点,同样利用聚合酶链反应（PCR）对上述各菌株的DNA序列进行扩增,发现所有大肠杆菌O157及1株大肠杆菌O8菌株都扩增出预期的803bp目的DNA片段,从1株EAggEC和1株ETEC菌也扩增出了803bp目的DNA片段.以大肠杆菌O157菌株94H的DNA为模板,根据Z4182基因设计合成的引物扩增出803bp的DNA片段,提取载体质粒pET28a（+）,将其与扩增的Z4182基因片段分别用NcoI、XhoI双酶切后,用T4 DNA连接酶进行连接,然后转化到表达宿主菌BL21（DE3）.利用PCR、双酶切以及核苷酸序列测定这三种方法分别对克隆的重组质粒进行鉴定.结果表明：803bp的Z4182基因定向克隆到了载体质粒pET28a（+）.表明重组菌株可以表达Z4182基因蛋白,表达的蛋白以包涵体形式存在,表达的蛋白分子量约为31,000Da,与预期的蛋白大小一致.不同诱导时间比较试验表明,诱导3-4小时蛋白表达量最高.
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