原花青素对顺铂诱导的HEi-OC1听细胞损伤的保护作用

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目的:探讨原花青素(OPC)对顺铂(DDP)引起的HEI-OC1听细胞损伤的保护作用及机制。  方法:实验分为正常对照组,单加保护药组,顺铂损伤组,顺铂损伤加药保护组。正常组细胞不加入任何药物,仅单纯更换细胞培养液;单加保护药组细胞,加入不同剂量(5umol,10umol/L)的原花青素,由DMEM稀释,作用24h;顺铂损伤组细胞加入20umol/L浓度顺铂,由DMEM稀释,作用24h;加药保护组细胞预先加入不同浓度原花青素作用12h,而后弃上清液,再加入20umol/L浓度顺铂作用24h。采用MTT法检测细胞存活率改变并在光镜下观察。利用Hoechst33258染色在荧光显微镜下观察细胞凋亡情况。流式细胞术检测HEI-OC1听细胞内活性氧(ROS)含量的改变。Real-time PCR检测促凋亡因子bax、抗凋亡因子bcl-2 mRNA表达水平的变化。Western blotting检测cleaved Caspase-3、Caspase-8凋亡蛋白表达水平的改变。  结果:与顺铂损伤组相比,预先加入OPC组MTT检测及光镜下观察到细胞的存活率升高;Hoechst33258染色显示细胞凋亡率降低(p<0.05);细胞内ROS含量显著降低(p<0.01);bax mRNA表达水平降低,bcl-2 mRNA表达水平升高(p<0.05);凋亡蛋白cleaved Caspase-3、Caspase-8表达明显降低(p<0.05)。  结论:OPC对顺铂诱导的HEI-OC1听细胞的凋亡有保护作用,抑制了其凋亡,使细胞内活性氧自由基(ROS)含量降低,Bax表达量降低,加药保护组细胞内caspase-3,caspase-8表达量均低于顺铂损伤组,提示OPC可通过抑制线粒体及细胞外源性凋亡途径抑制HEI-OC1细胞凋亡,对顺铂耳毒性的药物保护具有一定的借鉴意义。
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