乙型肝炎(HepatitisB)是由乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)引起的一种严重危害人类健康的传染性疾病，其治疗是人类目前面临的重大难题之一。我国有近1.3亿人患有乙型肝炎，是慢性乙型肝炎高发国。研究已发现不同基因型的HBV感染患者后，在临床病程和对治疗的反应上都存在着一定的差异，HBV基因分型对HBV感染的流行病学、病因学以及临床诊治具有重要意义。 本研究根据Genbank中查出的336种乙肝病毒(包括A-H八种基因型)的全基因组序列，利用DNASIS软件对全基因区域以及S基因区域进行同源性比较，设计出8对多重PCR反应的特异性引物，A-H各型特异扩增片段理论大小依次为353bp、181bp、688bp、140bp、774bp、589bp、224bp和237bp。 利用华美生物工程公司提供的乙肝病毒4℃-PCR检测试剂盒对826份乙肝疑似患者的血清样本进行阳性筛选，筛选出657份阳性样本；并用这8对引物对657份阳性样本进行单PCR分型，结果为A基因型1.98％(13/657)，B基因型14.31％(94/657)，C基因型49.77％(327/657)，BC基因混合型4.26％(28/657)，D基因型0.91％(6/657)。将四型(A、B、C、D)特异扩增的基因片段克隆到pGEM-T载体上，热激法转化大肠杆菌；对重组质粒中的插入片段进行DNA测序，四型特异扩增片断(353bp、181bp、688bp和140bp)与理论扩增片段大小相同，且与Genbank中已分型的HBV相应的碱基序列比对，结果基本相同。 建立并优化了多重PCR分型检测体系。优化结果为①反应体积为30μl，其中20×buffer1.0μl，Mg2+2.8mM，dATP、dCTP、dGTP和dTTP都为270μM，Taq酶2.5U，模板3.5μl，p1：p2=1：1且PA、PC终浓度为8pM，PC、PD终浓度为10pM，BB0.2μl。②循环参数为：94℃预变性300s，然后94℃变性45s、58℃退火45s、72℃延伸45s扩增25个循环，72℃终延伸300s。该体系灵敏度高达10-3fg级。 利用该多重PCR分型检测体系对本试验搜集的826份乙肝疑似患者血清分型，初步验证结果表明，该方法阳性检出率比乙肝病毒4℃-PCR检测试剂盒灵敏度高，分型结果与单PCR一致。该分型检测体系一次反应可以检测多个基因型、成本低、操作简单、用时短，敏感度高、特异性强和稳定性好等优点，有望推广应用于临床诊断。