【摘 要】
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目的:食管鳞状细胞癌（ESCC）是一种恶性肿瘤,是全球范围内与癌症相关的死亡的主要原因之一。缺乏有效的早期诊断和随之而来的肿瘤转移是导致ESCC死亡的关键因素。因此,我们迫切需要明确参与ESCC进展的更敏感和特异性的生物分子标记物,并揭示食管鳞癌发生发展的分子机制,以及提高肿瘤的早期诊断和改善不良预后。方法:1.通过mRNA高通量测序检测4对食管鳞癌组织的差异表达基因,并对筛选出的差异基因进行生物
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目的:食管鳞状细胞癌（ESCC）是一种恶性肿瘤,是全球范围内与癌症相关的死亡的主要原因之一。缺乏有效的早期诊断和随之而来的肿瘤转移是导致ESCC死亡的关键因素。因此,我们迫切需要明确参与ESCC进展的更敏感和特异性的生物分子标记物,并揭示食管鳞癌发生发展的分子机制,以及提高肿瘤的早期诊断和改善不良预后。方法:1.通过mRNA高通量测序检测4对食管鳞癌组织的差异表达基因,并对筛选出的差异基因进行生物信息学分析。2.运用RT-q PCR和Western Blotting方法检测KRT17在12对食管鳞癌及其相对应的癌旁组织表达情况,以及利用免疫组化技术检测64对食管鳞癌及癌旁组织中KRT17的表达水平并结合临床资料揭示KRT17表达水平对食管鳞癌患者预后的影响。3.运用慢病毒过表达和Crisper-Cas9技术分别构建KRT17过表达及敲除的食管鳞癌稳转细胞株,通过Western Blotting方法验证KRT17过表达及敲除效果。4.采用CCK8、平板克隆形成实验和裸鼠皮下成瘤实验检测KRT17过表达及敲除对食管鳞癌细胞增殖能力的影响;同时,通过细胞划痕实验、Trans-well迁移实验和裸鼠尾静脉注射实验研究KRT17过表达及敲除对食管鳞癌细胞转移能力的影响。5.通过RT-q PCR和Western Blotting方法检测KRT17对食管鳞癌细胞AKT信号通路相关蛋白（pan-AKT,473ser-AKT）和上皮-间质转化（EMT）相关蛋白（E-cadhrin,ZO-1,Vimentin,N-cadherin,snail）的影响;最后通过TCGA数据库81例食管鳞癌测序数据分析AKT通路激活和EMT的关系。结果:1.第二代mRNA高通量测序发现食管鳞癌癌组织中347基因上调,255个基因下调,并且结合生物信息学分析（PPI、GO、KEGG、IPA）发现KRT家族存在独立的蛋白-蛋白互作。2.研究发现在食管鳞癌组织中KRT17高表达,KRT13低表达;并结合临床资料发现KRT17高表达与食管鳞癌患者肿瘤分期和不良预后密切成正相关。3.体外细胞功能实验和体内裸鼠功能实验发现KRT17过表达后的食管鳞癌细胞的增殖能力和迁移能力都明显提高;而KRT17敲除后,食管鳞癌细胞的增殖能力和迁移能力都均受抑制。4.食管鳞癌细胞KRT17高表达促进AKT通路激活以及与EMT的发生成正相关,通过分析TCGA数据库81例食管鳞癌测序结果发现AKT通路激活与EMT发生密切相关。结论:1.KRT17在食管鳞癌中高表达并且与ESCC患者的TNM分期和不良预后密切相关。2.KRT17通过激活AKT信号通路诱导EMT发生促进食管鳞癌的增殖和转移。KRT17与食管鳞癌患者恶性进展密切相关可能作为ESCC患者早期诊断治疗的新生物学靶标。
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