高效絮凝性基因工程菌的构建

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微生物絮凝剂(Microbial Flocculant),简称MBF,是一种具有安全、高效、可生物降解、无环境污染等特点的新型絮凝剂。微生物絮凝剂在污水处理中有着广泛的应用,同时,在医药、食品加工、发酵等领域有很大的应用潜力。 本实验通过基因工程技术获得高效絮凝性微生物菌株。第一步,从酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中提取基因组DNA,采用PCR技术获取絮凝基因FLO1;第二步,通过酶切连接技术将.FLO1基因片段与大肠杆菌-芽孢杆菌的穿梭载体pHY300PLK连接构成重组质粒;第三步,将重组质粒转入大肠杆菌DH5a,使重组质粒在大肠杆菌中得到扩增;第四步,从大肠杆菌中提取出重组质粒pHY300PLK-FLO1,并将其转入最终的宿主细胞多粘芽孢杆菌(Bacilluspolymyxa)。 获得重组多粘芽孢杆菌后,对其生物活性进行了测定。测试表明,重组多粘芽孢杆菌BP413对生长条件适应性强。对pH值,可以适应pH5.0~9.0的范围;对温度,30℃最适应生长,但在20℃和40℃条件下,该菌也能生长良好;对渗透压,可以耐受10%氯化钠和200%蔗糖。重组多粘芽孢杆菌BP413的絮凝率是原多粘芽孢杆菌絮凝率的1.63倍。重组多粘芽孢杆菌BP4.13能够合成细胞壁蛋白,这是其产生絮凝作用的主要成分。
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