由于细菌耐药性的危害逐步凸现，疫苗作为细菌性疾病的有效防治手段其优势不断显现，地位不断提升。革兰氏阴性菌作为病原菌的一个重要组成部分，对人类的生产、生活都具有很大的危害，运用免疫蛋白质组学的相关理论与方法，能够高通量、高效率的筛选与鉴定革兰氏阴性菌的外膜蛋白(outer membrane proteins，OMPs)中具有较强的免疫识别作用的显性免疫原，可以通过对免疫原中和能力的比较评价最佳的疫苗候选靶位。 本论文克隆表达了4个革兰氏阴性菌中的重要致病菌种—溶藻弧菌的外膜蛋白，同时利用实验室已有的22种溶藻弧菌外膜蛋白的克隆表达株共26个重要的溶藻弧菌的外膜蛋白，运用免疫蛋白质组学与基因工程等相关理论与技术，进行免疫原层次识别分析的研究。通过试验论证了，在同等条件下，不同抗原对宿主具有不同强度的抗原反应，而且同时作用于宿主的抗原具有相互竞争与抑制的特征，发现了这26个溶藻弧菌重要外膜蛋白之间相互竞争与抑制的关系，初步构建了相应的免疫识别层次，为研制致病菌疫苗的候选靶标提供了新的有效的途径与方法，使细菌性疾病防治疫苗的研制更加有效、有针对性，因此具有非常重要的理论与现实意义。 本论文根据溶藻弧菌与副溶血弧菌的具有高度亲缘关系，按GenBank中副溶血弧菌的基因序列，设计了4对外膜蛋白的基因引物，以溶藻弧菌基因组DNA为模板，采用PCR技术扩增获得4个基因，进一步以pET—32a质粒为载体，构建出相应的4种重组质粒，在E.coliBL21菌株中进行表达。纯化并定量了包括实验室已有的22个外膜蛋白共26个溶藻弧菌的重要外膜蛋白。 勾画出26个溶藻弧菌重要外膜蛋白的免疫保护层次，第一免疫保护层次为：VA1440，VPA1745，VA2309，VPA1186，VA2241，VA1267，VA0741；第二免疫保护层次为：VA0449，VA0764，OmpV，OmpR，VPA0860，VA0802，VPA1615：第三免疫保护层次为：VA2265，VPA0225，VA0425。初步阐明26个溶藻弧菌外膜蛋白之间相互竞争与抑制的关系，构建了相应的免疫原层次识别的初步网络，对发现病原菌疫苗候选靶标具有重要意义。