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目的： 异构酶Pin1在人类多种肿瘤中高表达，而MSK1激酶异常活化又能促进细胞的恶性转化。本研究以MSK1激酶为靶点，探讨异构酶Pin1对MSK1激酶活性的调节及在鼻咽细胞癌变中的作用及机制。本课题的完成将明确Pin1与MSK1激酶之间的相互作用关系以及异构酶Pin对MSK1激酶磷酸化后的调控作用，探究鼻咽癌发生发展中异构酶Pin1和MSK1激酶分子机制，为鼻咽癌的早期诊断和临床治疗以及预后评估提供可靠的实验依据。 方法： 1.免疫组织化学检测p-MSK1（Thr581）和异构酶Pin1在鼻咽癌组织中的表达情况，并分析两者是否有相关性； 2.激光共聚焦实验检测鼻咽癌细胞中p-MSK1（Thr581）和异构酶Pin1的表达情况，并分析两者是否共定位表达； 3.生物信息预测使用计算机模拟并预测MSK1激酶与异构酶Pin1结合的关键性位点； 4.免疫共沉淀实验研究 MSK1激酶的氨基酸位点(Ser376、Thr581、Ser376/Thr581)突变后与异构酶Pin1的相互结合能力改变； 5. MSK1激酶活性实验检测 MSK1激酶氨基酸位点(Ser376、Thr581、Ser376/Thr581)突变后对 MSK1激酶活性的影响，以及高低表达异构酶 Pin1对MSK1激酶活性的影响； 6. qRT-PCR检测异构酶Pin1（高/低表达）对MSK1及下游蛋白基因 mRNA表达的调控作用； 7. Western blot检测异构酶Pin1（高/低表达）对MSK1及下游蛋白的蛋白水平的调控作用； 8.平板克隆实验检测异构酶Pin1（高/低表达）对MSK1激酶蛋白稳定性的影响，CCK8实验检测 MSK1激酶氨基酸位点突变（Thr581）对鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞对MSK1激酶蛋白稳定性的影响； 9. qRT-PCR实验验证鼻咽癌细胞CNE2-Z中MSK1激酶若干氨基酸位点突变（Ser376、Thr581、Ser376/Thr581）后MSK1激酶信号通路下游相关目标蛋白转录水平mRNA变化的影响； 结果： 1.免疫组织化学实验显示，癌旁组织和鼻咽癌组织中p-MSK1（Thr581）和异构酶Pin1的表达呈相关； 2.激光共聚焦实验证实p-MSK1（Thr581）和异构酶Pin1主要在鼻咽癌细胞CNE2的细胞核中表达，表达存在共定位； 3.生物信息预测使用计算机模拟发现,MSK1激酶与异构酶Pin1结合的潜在位点有11个，而其中Thr581可能是最关键的位点； 4.外源性免疫共沉淀结果显示：MSK1氨基酸位点Thr581突变后MSK1激酶与异构酶 Pin1结合能力减弱程度；内源性免疫共沉淀结果显示：异构酶 Pin1与MSK1激酶两蛋白质之间能相互结合。 5. MSK1激酶活性实验显示，异构酶Pin1过表达则MSK1激酶活性上调，反之干扰异构酶Pin1的表达则MSK1激酶活性下降，差别显著有统计学意义（P＜0.001）；CNE2、293T细胞、CNE1细胞中MSK1激酶氨基酸位点(Ser376、Thr581、Ser376/Thr581)突变后导致MSK1激酶活性可能有不同程度的降低。 6.实时荧光定量qRT-PCR结果显示，通过CNE1-Lv5、CNE1-Pin1两组细胞的相互比较，可知高表达异构酶 Pin1可以上调 c-jun、c-fos等即刻早期基因（immediate-early gene，IEG）的 mRNA的表达。反之，通过 CNE2-Lv3、CNE2-SiPin1两组细胞的相互比较，可知沉默异构酶Pin1的表达可以下调c-fos、c-jun、mRNA的表达，差别有统计学意义。 7. Western blot结果显示，与对照组相比较，鼻咽癌细胞CNE1过表达异构酶Pin1（EGF刺激15min）后c-jun、p-H3(Ser10)的表达水平明显上调；而与对照组相比较，鼻咽癌细胞 CNE2转染SiRNA沉默 Pin1的表达后c-jun、p-H3(Ser10)表达水平明显下调。 8.平板克隆实验结果显示沉默异构酶Pin1和MSK1激酶可下调鼻咽癌细胞CNE2的恶性增殖作用，而且沉默异构酶Pin1的表达可下调MSK1激酶促鼻咽癌细胞CNE2恶性增殖作用；CCK8实验结果显示与转染wt-MSK1质粒组相比较， MSK1激酶Thr581位点突变为Ala可减低鼻咽癌细胞CNE2的增殖作用。 9. qRT-PCR实验证实鼻咽癌细胞 CNE2-Z中 MSK1激酶若干位点突变（Ser376、Thr581、Ser376/Thr581）可能会导致MSK1激酶信号通路下游相关目标蛋白c-jun和c-fos转录水平mRNA有不同程度的下调。 结论： 本研究实验证实：MSK1激酶是异构酶 Pin1的一个新的调节靶点，异构酶Pin1通过作用于 MSK1激酶 Thr581磷酸化位点调控 MSK1激酶功能。异构酶Pin1能增强MSK1激酶活性并调节下游基因c-fos和c-jun的表达，促进鼻咽癌细胞的恶性增殖。异构酶Pin1对MSK1激酶磷酸化后的调控作用在鼻咽癌发生发展过程可能有着至关重要的作用。