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目的:探讨阳离子脂质体介导的Skp2siRNA对体外培养的兔晶状体上皮细胞增殖的抑制作用。
方法:应用脂质体将质粒pSuppressorNeoSkp2siRNA、质粒pSuppressorNeo分别转染入体外培养的兔品状体上皮细胞,G418筛选抗性克隆。采用免疫组化、Western Blot检测Skp2蛋白的表达。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测转染后第1、2、3、4、5天该细胞的体外增殖抑制率。
结果:
1、兔晶状体上皮细胞中Skp2蛋白表达下调。免疫组化染色显示空白对照组、空质粒组Skp2蛋白表达呈阳性,质粒Skp2siRNA组Skp2蛋白表达呈阴性;Western Blot检测显示空白对照组、空质粒组Skp2蛋白呈高表达,质粒Skp2siRNA组Skp2蛋白表达明显下调。
2、转染质粒pSuppressorNeoSkp2siRNA后兔晶状体上皮细胞与未转染组比较增殖受到明显抑制;转染质粒pSuppressorNeo组细胞增殖也受到抑制,但抑制效果低于质粒pSuppressorNeoSkp2siRNA组。
结论:转染Skp2siRNA的兔晶状体上皮细胞Skp2蛋白表达下调,从向对体外培养的兔晶状体上皮细胞的增殖具有抑制作用。