盐酸洛拉曲克在体外促进人肝癌细胞HepG-2凋亡的实验研究

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:mmoxx
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目的:研究盐酸洛拉曲克对体外培养人肝癌细胞HepG-2的增殖抑制作用和对肝癌细胞HepG-2凋亡抑制基因Bcl-2表达的影响。方法:MTT比色法观察盐酸洛拉曲克对人肝癌细胞株HepG-2增殖的抑制作用;用免疫细胞化学染色法检测其对人肝癌细胞HepG-2凋亡抑制基因Bcl-2的表达影响。结果:1、实验前HepG-2细胞为贴壁的梭形细胞,细胞排列紧密,生长增殖速度快,每2~3天需传一代;在加入化疗药物盐酸洛拉曲克12h后镜下观察细胞形态变为圆形,体积变小,细胞密度增加和细胞固缩,细胞膜和核膜完整,线粒体发生超浓缩和染色质进行性固缩,并向核周“崩溃”形成一个或多个块状结构、“致密球体”或向外“发芽”形成葡萄串样小球体。24后观察镜下视野模糊,细胞膜损伤﹑肿胀﹑裂解。2、肿瘤细胞体外药物敏感性检测即MTT法,试验设立三组药物即(ADM组、DDP组、盐酸洛拉曲克组)每组药物设立四个浓度梯度,同时设立空白对照组,结果显示,盐酸洛拉曲克对人肝癌细胞HepG-2的生长具有显著的抑制作用,促进肿瘤细胞的凋亡,高浓度组的生长抑制率可达80.15%,具有良好的量效关系,其中高浓度给药组的抑瘤率最高,其次是中浓度组,对每个瘤株均重复实验3次,实验结果的重复性比较好。当各组药物浓度达到最大时盐酸洛拉曲克组与阳性对照组(ADM组和DDP组)比较其肿瘤细胞的抑制率分为80.15%、48.12%、51.69%,差异有统计学意义(P=0.013,x2检验)。3、免疫细胞化学染色结果显示,对不同浓度盐酸洛拉曲克作用的肝癌HepG-2细胞Bcl-2的表达进行检测,未用药物干预组(对照组)阳性细胞呈棕黄色,染色较深,颗粒分布密集,低浓度组(2μg/ml)与对照组相比未见明显区别,中浓度组(20μg/ml)与高浓度组(200μg/ml)较对照组阳性细胞呈淡染,其中高浓度组尤为明显,颗粒分布疏松。随着盐酸洛拉曲克浓度的递增,凋亡指数逐渐增加,即肿瘤细胞迅速减少,而Bcl-2阳性细胞表达率逐渐下降。当药物浓度达到最大时(200μg/ml),凋亡指数最大达48.95±3.32,而Bcl-2的阳性表达率最低为10.62±1.21,同时与对照组比较P<0.05,具有统计学意义。结论:1、盐酸洛拉曲克对人肝癌细胞HepG-2的生长具有显著地抑制作用,其单药组生长抑制率明显高于ADM组和DDP组,且高剂量组抑制率明显高于其它剂量组,具有良好的量效关系。2、盐酸洛拉曲克能下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达,促进肿瘤细胞的凋亡。
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