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目的:乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤,PTX为乳腺癌临床常用化疗药物,在治疗乳腺癌方面具有良好的疗效,但随着药物的持续使用,耐药现象严重制约了其临床疗效。UA是广泛分布于山楂、熊果、白花蛇舌草等植物中的五环三萜类化合物,其具有抗肿瘤、抗氧化等多种作用,我们前期研究发现UA能逆转乳腺癌紫杉醇MCF-7细胞的耐药,且可以促进mi R-149的表达水平,降低My D88的表达水平,在此基础上进一步通过体内、体外实验探索UA逆转乳腺癌紫杉醇耐药的作用及其分子机制,为UA联合PTX的临床应用提供理论依据。方法:1.通过CCK-8法检测不同浓度的UA和PTX分别作用231与231/PTX细胞的增殖抑制率,筛选出安全的用药浓度;流式细胞术检测PTX作用后的细胞凋亡;q RT-PCR检测PTX作用后细胞Bax和Bcl-2基因表达水平,Western Blot检测Bax和Bcl-2的蛋白表达水平,鉴定231/PTX耐药株的耐药性。2.以231/PTX细胞为实验对象,分为6组:空白对照组、UA20μM作用组、PTX30μM作用组、PTX60μM作用组、PTX30μM联合UA20μM组、PTX60μM联合UA20μM组,通过流式细胞术检测凋亡,q RT-PCR检测mi R-149-5p、My D88、Bax、Bcl-2的基因表达水平,Western Blot检测My D88、Bax、Bcl-2的蛋白表达水平,检测UA逆转乳腺癌紫杉醇的耐药作用及对凋亡的影响。3.通过慢病毒转染,构建过表达mi R-149-5p、干扰mi R-149-5p、过表达My D88、干扰My D88的231/PTX细胞系、干扰mi R-149-5p的231细胞系,q RT-PCR检测mi R-149-5p、My D88的m RNA表达水平;CCK-8法检测基因改变后药物对细胞增殖的影响;Western Blot检测过表达mi R-149-5p、干扰My D88后231/PTX细胞My D88、Bax、Bcl-2、PI3K、Akt、P-Akt的蛋白表达水平,检测基因改变对信号通路的影响。4.根据软件预测结果,构建p GL3-My D88 3’UTR荧光素酶报告载体转染231/PTX细胞,观察My D88转录活性改变,检测mi R-149-5p对My D88的调控作用。5.建立裸鼠乳腺癌231/PTX细胞皮下移植瘤模型,将模型分为5组,即对照组、UA10mg/kg用药组、PTX10mg/kg用药组、PTX20mg/kg用药组、UA10mg/kg联合PTX10mg/kg用药组,记录肿瘤生长变化,剥离肿瘤后检测肿瘤瘤体重量及体积,Western Blot检测组织Bax、Bcl-2的蛋白表达水平,检测UA对裸鼠体内乳腺癌紫杉醇耐药的逆转作用。结果:1.筛选出UA的安全用药浓度为0-40μM。PTX对231/PTX细胞的增殖抑制作用明显高于231细胞,对231/PTX细胞的促凋亡作用低于231细胞。231/PTX细胞Bax基因和蛋白的表达水平低于231细胞,231/PTX细胞Bcl-2基因和蛋白的表达水平高于231细胞。2.UA联合PTX作用能促进PTX对231/PTX细胞的增殖抑制作用和促凋亡作用,促进mi R-149-5p的基因、Bax的基因和蛋白的表达水平,降低Bcl-2、My D88的基因和蛋白的表达水平。3.UA促进231/PTX细胞中mi R-149-5p的表达、降低My D88的表达。4.过表达mi R-149-5p和干扰My D88后,231/PTX细胞对PTX的敏感性上升;干扰mi R-149-5p后,231细胞对PTX的敏感性下降。干扰mi R-149-5p和过表达My D88后,UA逆转231/PTX细胞紫杉醇耐药的作用降低。过表达mi R-149-5p、干扰My D88后PI3K、P-Akt的蛋白表达水平下降。5.荧光素酶报告显示mi R-149-5p直接靶向My D88的3’-UTR。6.UA逆转裸鼠体内乳腺癌紫杉醇耐药的作用。结论:1.熊果酸逆转乳腺癌231/PTX细胞紫杉醇耐药的作用。2.mi R-149-5p在231/PTX细胞内能直接靶向调节My D88基因。3.My D88通过PI3K/Akt通路介导乳腺癌对紫杉醇的耐药性。4.熊果酸通过促进mi R-149-5p的表达、降低My D88的表达逆转乳腺癌紫杉醇的耐药。