【摘 要】
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5C5分化抗原是本实验室从人B细胞株3D5克隆到的,由人cDNA编码,它表达于3D5细胞的胞膜,但功能不明.为了更深入了解5C5分化抗原的功能,本论文工作分别用酵母双杂技术和基因芯片
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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5C5分化抗原是本实验室从人B细胞株3D5克隆到的,由人cDNA编码,它表达于3D5细胞的胞膜,但功能不明.为了更深入了解5C5分化抗原的功能,本论文工作分别用酵母双杂技术和基因芯片技术做了如下的研究:1)在酵母菌中构建了用于酵母双杂交实验的3D5细胞cDNA文库,用酵母双杂交技术从文库中钓取了46个阳性克隆.在排除假阳性及未知功能的蛋白质后,选择肌球蛋白作了进一步的验证.免疫共沉淀及GST-PULLDOWN试验均证实了5C5分子与肌球蛋白间存在相互作用.2)用含有4097个基因(包括原癌基因和抑癌基因、离子通道和运输蛋白、细胞周期蛋白类、外压反应蛋白、细胞骨架和运动、细胞凋亡相关的蛋白、DNA合成和修复和重组蛋白、DNA结合和转录和转录因子、细胞受体、免疫相关、细胞信号和传递蛋白、代谢、蛋白翻译合成、发育相关、其它)的芯片所作的分析显示,与5C5分化抗原表达正常的野生型细胞(W)相比,5C5分化抗原表达抑制的3D5细胞(AS)中有30个基因的表达下调,它们涉及干扰素受体1、SMARCC2、ADP核糖基化因子、钾离子电压门控通道、脂调节的血小板激活因子受体等.RT—PCR验证了其中9个基因,有8个的结果与基因芯片检测相符.
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