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我国60%以上的居民以稻米为主食,是世界上最大的水稻生产和消费国。同时,水稻作为全球主要的粮食作物,其产量直接关系着世界的粮食安全。稻瘟病是水稻生产过程中最严重的病害之一,全球每年仅由稻瘟病造成的产量损失就高达11%～30%。近年来的研究发现,micro RNA通过调控靶基因参与到水稻抗病的各个通路之中,从而提高或降低水稻稻瘟病抗性。因此鉴定和研究与稻瘟病相关的micro RNA,可以加深对micro RNA在水稻响应稻瘟病菌过程中作用机理的认识,为防治稻瘟病提供一定的理论依据。本研究以高抗稻瘟病水稻材料H4及感稻瘟病品种中二软占为材料,通过Northern blot及stem-loop RT-q PCR对课题组前期经small RNA测序获得的novel micro RNA进行表达鉴定;结合生物信息学预测以及降解组测序结果初步确定了novel micro RNA的靶基因,并对其中的novel micro RNA T21、T34进行了初步功能研究,取得以下研究结果:（1）Northern blot及stem-loop RT-q PCR的结果表明,T15、T21、T22、T52等15个novel micro RNA在抗、感病材料中均有表达。接种稻瘟病菌0～72小时内,T48、T49和T50的表达量在抗、感病材料中均下调,而T15、T21及T30的表达量先上升后下降,T25、T31、T34及T42的表达量在抗、感病材料中差异明显。（2）45个novel micro RNA一共预测到了2260个靶基因,这些靶基因几乎涵盖了所有降解组测序所得的23个novel micro RNA的175个靶基因,表明基于互补配对原则的靶基因预测数据较为全面。（3）通过生物信息学分析发现T21、T34分别位于水稻第2、第12号染色体上,均属于基因间micro RNA,在序列上高度保守,与莲花、大豆、人类部分micro RNA有较高的同源性。组织特异性表达分析表明,T21主要在芽鞘、叶片中表达,而T34主要在茎、叶片、节间中表达。（4）通过构建GFP-靶基因融合表达载体结合烟草瞬时表达系统,初步确定了T21靶向剪切多胺氧化酶基因Os PAO4及类似于半胱氨酸合成酶基因LOC＿Os05g51380.1;T34靶向蛋白磷酸酶2C家族基因Os PP2C21和含F-box结构域蛋白Os FBX21。通过T21、T34与靶基因的表达量分析及Western blot分析进一步证实了T21、T34对靶基因的抑制作用。（5）过表达T21会增加水稻对稻瘟病菌的敏感性,而敲除及靶模拟T21增强了稻瘟病抗性,推测T21通过抑制Os PAO4及LOC＿Os05g51380.1的表达以调控H2O2的积累和半胱氨酸的合成从而负调控稻瘟病抗性。过表达T34会减弱水稻对稻瘟病菌的敏感性,而敲除及靶模拟T34会降低水稻稻瘟病抗性,而且T34靶基因Os PP2C21和Os FBX21的表达受稻瘟病菌显著抑制,推测T34通过负调控Os PP2C21和Os FBX21的表达来调节水稻基础免疫反应。综上所述,本研究通过Northern blot及stem-loop RT-q PCR共鉴定到15个micro RNA。初步确认T21通过靶向Os PAO4及LOC＿Os05g51380.1负调控水稻稻瘟病抗性,而T34靶向Os PP2C21和Os FBX21提高了水稻的基础免疫反应。本研究对前期small RNA的测序结果进行了补充验证,为后续研究这些micro RNA提供了有力依据。同时,对T21、T34进行初步功能研究,加深了对micro RNA在水稻响应稻瘟病菌侵染过程中的认识,为防治稻瘟病提供一定的理论依据。