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目的:将IGF-I基因和α-SMA基因(基因库中正式名称为ACTA2)转染到肌源性干细胞中。
方法:1.重组质粒pEFGP-IGF-I,用脂质体方法转染至肌源性干细胞中,转染72小时、1周后观察转染情况。
2.重组质粒pGC-FU-ACTA2,及包装质粒pHelper1.0和pHelper2.0,在293T细胞感染并收集病毒颗粒,包装质粒,检测慢病毒滴度。WESTER.BLOT分析检测ACTA2基因的体外表达情况,转染至肌源性干细胞中,转染72小时、1周后观察转染情况。
结果:1.经转染IGF-I基因后1周MDSCs稳定表达IGF-I,基因转染率60%。
2.慢病毒体系包装顺利,经测定滴度为2E+8,WESTER.BLOT分析ACTA2基因的表达情况良好;经转染ACTA2基因后1周MDSCs稳定表达ACTA2,基因转染率80%。
结论:1.利用脂质体转染法能够将IGF-1基因转染MDSCs中并得到表达,转染的细胞生长良好。
2.利用慢病毒载体转染法能将ACTC2基因转染MDSCs中并得到表达,转染的细胞生长良好。