【摘 要】
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在该论文中,使用bldA基因的高效置换质粒SCE25AT构建天蓝色链霉菌A2（2）菌株M145基因缺失突变体的过程中,发现并证实了作为基因组测序模板的该菌株bldA不能置换,相应基因型称bld
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在该论文中,使用bldA基因的高效置换质粒SCE25AT构建天蓝色链霉菌A2（2）菌株M145基因缺失突变体的过程中,发现并证实了作为基因组测序模板的该菌株bldA不能置换,相应基因型称bld<->,代表bldA-dependent.为了阐明M145中bldA不能中断的原因,首先尝试使用鸟枪法,从bld<->菌株天蓝色链霉菌M600中随机克隆bld基因.鸟枪克隆实验中得到共约15,000个转化子,从其中筛选得到21个呈现光秃表型的鸟枪克隆子;但抗性验证表明这21个鸟枪克隆子中并未携带bad基因.另一方面,该实验结果暗示,M145中的bad突变有可能是显性突变.为了探寻M145的145个含有TTA密码子的ORF是否有必需基因,选择其中5个ORF：SC4C6.27c、SCE25.32c、SCF62.25、SCH35.42c和SC6D7.05c,分别构建了基因破坏结构pHZ1111、pHZ115、pHZ1116、pHZ1118和pHZ1119.并利用这些破坏结构得到了相应的基因缺失突变体WM1、WM5、WM6、WM8和WM9.抗性验证和表型观察,发现这5个ORF不具有与链霉菌分化发育和产素等直接相关的基因功能.鸟枪克隆子pSPA1-a和SPA1-b有促进bldA缺失突变株产株产素和气生菌丝建成的作用.pSPA1-a中的3.1kb外源片段包含有两个完整的ORF（SC7H2.26和SC7H2.27）和一个tRNA基因trnL-TTG.对trnL-TTG进行亚克隆,得到亚克隆质粒pHZW5.将pHZW5引入bld<->菌株J1681、J1700后,发现pHZW5可以产生和pSPA1-a同样的效果,初步表明：pHZW5中的外源片段有一定的功能.对于野生型菌株中bldA中断后,是否由tRNA(Leu)UUG进行UUA密码的翻译,则需要进一步的实验.
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