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大肠杆菌发酵中很容易产生乙酸，抑制菌体生长和外源基因表达。本研究采用耐乙酸突变株DA19作为宿主菌，用带有碱性磷酸酯酶phoa启动子及其信号肽序列的重组质粒来分泌表达hEGF。摇瓶培养表明合适的碳氮比有利于菌体生长，能提高菌体对葡萄糖和复合氮源的得率；在5-L发酵罐中进行恒pH补料分批发酵实验，优化培养基中的复合氮源浓度后，菌体对葡萄糖和复合氮源的得率提高了，这与摇瓶培养的结果是一致的，同时hEGF对葡萄糖和复合氮源的得率以及hEGF的比生产速率也都增加了。采用基本培养基在5-L罐中进行补料分批培养，发现pH对hEGF的分泌表达有很大影响，最适pH下表达水平提高到原来的5．2倍。在较高的乙酸浓度下，DA19(pAET8)仍能较好地分泌表达hEGF。发酵生长阶段后期发生氮源限制，加入铵盐或少量复合氮源就能加速磷的消耗，降低乙酸产生，缩短发酵时间，提高hEGF比生产速率。