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褶纹冠蚌(Cristaria plicata)作为我国重要的淡水育珠蚌之一,易受病原体感染而发生疾病,育珠能力产生了较大的影响,因此开展其分子免疫的研究具有重要意义。超氧化物歧化酶(SOD)能清除生物氧化过程中所产生活性氧(ROS)而对细胞具有保护作用。本研究对褶纹冠蚌icCuZnSOD基因进行了克隆和重组表达载体构建,并对重组rCpSOD基因在大肠杆菌中进行表达和纯化,测定蛋白活性及稳定性,并初步评估其功能。本文通过利用RT-PCR结合RACE-PCR的方法克隆出褶纹冠蚌CpSOD cDNA全长,将基因和表达载体pET-30a经KpnI、EcoRI双酶切之后,连接,构建重组表达质粒。将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)中,加入IPTG时,同时加入或不加入Cu2+/Zn2+分别在37℃和20℃进行诱导,采用Ni2+亲和层析镍纯化蛋白的方法,对包涵体和可溶蛋白分别进行纯化和活性测定,并考察活性最高rCpSOD蛋白酶的热稳定性、pH稳定性和对变性剂的稳定性。用rCpSOD小鼠抗血清对诱导的融合蛋白进行Western-blot分析抗原性。最后建立乙醇损伤细胞的模型,探讨rCpSOD对乙醇损伤人L02肝细胞的保护作用。SDS-PAGE结果表明,37℃诱导表达的蛋白主要是包涵体形式,而20℃诱导则能够产生可溶性蛋白,并且在补充有Cu2+/Zn2+时有助于可溶rCpSOD的产生。进一步的SOD酶活性分析表明,不管补充Cu2+/Zn2+诱导与否,在37℃和20℃诱导的包涵体蛋白复性后活性都低于1000U/mg,且20℃比37℃诱导的包涵体蛋白活性低；20℃诱导产生的可溶蛋白酶活性则明显升高,补充Cu2+/Zn2+诱导产生的rCpSOD酶活性最高,达5300 U/mg,说明在低温培养及补充Cu2+/Zn2+时有利于可溶rCpSOD的体外诱导表达并且有利于其酶活性的提高。纯化的可溶性rCpSOD蛋白在温度60℃和pH 2-9内活性稳定,并可耐受8mol·L-1的尿素和8%的十二烷基硫酸钠(SDS)。制备鼠rCpSOD的多抗血清,经Western blotting分析,目的基因SOD的表达产物能够被鼠多克隆抗体特异性识别。此外,在乙醇损伤人L02肝细胞模型中,结果表明有活性的rCpSOD酶可以保护L02肝细胞免受氧化损伤。