论文部分内容阅读
目的：探索CA12的表达与乳腺癌紫杉醇耐药细胞的相关性；并观察CA12-siRNA对乳腺癌细胞凋亡以及紫杉醇敏感性的影响，试图为紫杉醇耐药乳腺癌细胞的治疗提供新的策略。 方法：体外培养正常乳腺细胞（MCF-10)、乳腺癌细胞（MCF-7)及乳腺癌紫杉醇耐药细胞（MCF-7 TaxR),并将后两者各自分为三组：实验组（CA12-siRNA)、阴性对照组（Scramble-siRNA)以及空白对照组（DMSO) 1、western blot的方法检测 CA12-siRNA转染前后 MCF-10、MCF-7及MCF-7 TaxR中CA12的表达 2、MTT法检测MCF-7 TaxR在 CA12-siRNA转染前后紫杉醇的敏感性。 3、相差显微镜及经Hoechst33342染色后，荧光倒置相差显微镜以及流式细胞仪检测单纯转染siRNA及 siRNA联合紫杉醇两种处理方法下，MCF-7及MCF-7 TaxR各组细胞凋亡情况。 4、western blot检测经线粒体途径介导的凋亡相关蛋白表达量。 结果：1、相较于MCF-10组，CA12在MCF-7以及MCF-7 TaxR组中高表达，组间两两比较结果具有统计学差异。 2、经携带CA12的siRNA转染后，CA12在MCF-7以及MCF-7 TaxR实验组中表达量下降，相较于两对照组（空白+阴性）结果有统计学意义（P<0.01)。 3、CA12-siRNA转染细胞与紫杉醇共同培养48小时，MCF-7 TaxR的实验组较两对照组（空白+阴性）紫杉醇敏感性降低，结果具有统计学意义（P<0.05)。 4、CA12-siRNA转染细胞与紫杉醇共同培养48小时，实验组较两对照组（空白+阴性）细胞凋亡数增多，结果具有统计学意义（P<0.05)。 5、CA12-siRNA转染细胞与紫杉醇培养48小时，用 western blot的方法检测线粒体通路相关蛋白的表达， MCF-7 TaxR细胞的结果显示实验组与两对照组（空白+阴性）相比，抗调亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl的表达量明显下调，而促调亡蛋白Bax、Bid的表达明显增加，同时下游效应分子caspase-9、caspase-7和 PARP的活化蛋白Cleaved caspase-7、Cleaved caspase-9、Cleaved PARP表达也明显增加，差异具有统计学意义（P<0.05)。 结论：CA12在乳腺癌细胞MCF-7及乳腺癌紫杉醇耐药细胞MCF-7 TaxR中高表达，表明C A12的表达与乳腺癌相关，且与耐药相关。其表达可以被CA12-siRNA特异性敲低。CA12的沉默联合紫杉醇可以经激活线粒体细胞凋亡通路，促使MCF-7 TaxR细胞凋亡，增加乳腺癌紫杉醇耐药细胞对于紫杉醇的敏感性。