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[目的]体外培养用PMA(佛波酯)将THP-1(人单核细胞株)细胞株诱导成巨噬细胞,使用同一浓度伯氏疏螺旋体重组膜蛋白-rBmpA刺激巨噬细胞,收集不同时间点的细胞,检测Toll样受体信号通路中的一个关键接头分子——髓样分化因子(MyD88)mRNA和蛋白的表达量,来探讨莱姆病螺旋体毒力因子诱发促炎趋化因子风暴的发生机理。[方法]1、THP-1细胞培养:在37℃,5%C02培养箱中用含10%胎牛血清的1640培养基培养THP-1细胞,平均3-4天换液传代一次。2、THP-1细胞诱导:调整THP-1细胞数为5 X 105/mL,加入PMA,使PMA的浓度为600ng/mL。将细胞悬液加入到24孔细胞培养板中,500μL/孔,37℃,5%C02培养箱中培养24小时诱导细胞贴壁。3、用LPS、rBmpA处理经THP-1细胞诱导的巨噬细胞:细胞贴壁后,吸掉上清,之后加入LPS及rBmpA处理细胞,放入37℃,5%C02培养箱中培养6小时,12小时,24小时,48小时。分别收集各时间点细胞。4、mRNA和蛋白表达量的检测:用细胞裂解液和蛋白裂解液分别处理细胞,用real-time PCR和western blot研究MyD88 mRNA和蛋白水平表达量。[结果]1、细胞在10%胎牛血清的1640培养基中悬浮生长,生长状态良好。2、THP-1细胞在600ng/ml-PMA作用下成功分化为贴壁的巨噬细胞。3、巨噬细胞经LPS和rBmpA的刺激作用产生明显变化。4、检测不同时间点rBmpA刺激巨噬细胞后MyD88 mRNA的相对表达量,与正常对照组比较,差别大多有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。5、检测不同时间点rBmpA刺激巨噬细胞后巨噬细胞中MyD88蛋白表达量,与正常对照组比较,差别大多有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。[结论]rBmpA在刺激巨噬细胞通过Toll样受体信号通路产生炎症反应时,接头蛋白MyD88起到关键作用。