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帕金森病(parkinsonsdisease,PD)是一种常见于中老年人的进行性神经系统变性疾病,其最显著的病理特征是位于黑质的多巴胺神经元进行性丢失。以左旋多巴作为多巴胺合成的前体补充脑内多巴胺仍是目前最常用也是最有效的治疗方法,但是长期使用不良反应大。因此寻找新型的抗PD药物具有重要的意义。LLDT-67是中药雷公藤(TripterygiumWilfordiiHook,TWHF)主要活性成分雷公藤内酯醇(triptolide,T10)的衍生物,具有抗炎、抑制免疫反应等功效,本研究旨在探讨该类化合物是否对帕金森病等神经退行性疾病治疗作用及其可能的作用机制。
本工作利用MPTP(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导的小鼠亚急性PD模型和鱼滕酮(Rotenone)诱导的大鼠慢性PD模型种PD动物模型,并结合体外原代星形胶质细胞培养和SH-SY5Y的细胞模型,通过行为学实验、免疫组化、HPLC、western和Elisa等实验手段评价了LLDT-67的神经保护作用并在MPTP模型中探讨其可能的作用机制。行为学和免疫组化,以及HPLC结果显示,在MPTP诱导的小鼠亚急性PD模型中,LLDT-67能够保护MPTP诱导的小鼠黑质和纹状体的酪胺酸羟化酶(tyrosinehydroxylase,TH)阳性神经元和神经纤维丢失,以及纹状体多巴胺神经递质减少,并减轻小鼠运动徐缓症状。在鱼藤酮诱导的大鼠慢性PD模型中,LLDT-67在大鼠黑质纹状体DA通路损毁前或损毁后给药,都能一定程度地保护Rotenone引起的黑质和纹状体的TH阳性神经元和神经纤维丢失,以及纹状体多巴胺神经递质减少,并减轻大鼠行为上的自发活动减少症状。免疫荧光、western和Elisa等实验结果显示LLDT-67能够诱导小鼠黑质、纹状体的星形胶质细胞表达分泌神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF),进而引起TrkA受体Try751酪氨酸位点磷酸化；同时下调p75神经营养因子受体(p75neurotrophinreceptor,p75NTR)表达,从而上调AKT磷酸化水平,促进神经元存活。体外实验结果显示,LLDT-67可以促进体外原代培养小鼠星彤胶质细胞合成分泌NGF。降低SH-SY5Y细胞中p75NTR表达,升高AKT磷酸化水平,降低Bad的表达,具有细胞保护作用。
本研究结果证明LLDT-67在MPTP小鼠亚急性PD模型和Rotenone大鼠慢性PD模型中有一定程度的神经保护作用。其机制一方面可能是促进星形胶质细胞合成分泌NGF,间接通过TrkA和p75NTR介导上调AKT磷酸化水平；另一方面可以直接降低p75NTR表达,升高AKT磷酸化水平,降低Bad的表达,支持细胞存活。