工业革命以来，世界经济的发展离不开能源的发展，化石燃料一直是能源供应的主流、经济发展的支撑点。但是，随着科学技术的发展、工业的进步以及人口的膨胀，对能源的需求越来越紧迫。但是由于这些化石燃料属于不可再生燃料，在不同程度上都会对环境造成污染和破坏，因而找到一种可再生的燃料将是关键。生物作为可再生能源开发的媒介尤为重要，其中以可再生的燃料乙醇凸显。作为传统真核模式生物菌的酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）是典型的乙醇产生菌，现已被广泛的用于生物乙醇的实验研究和发酵生产。　　 甘油是酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）乙醇代谢的主要副产物之一。酿酒酵母中含有两个基因（HOR2，RHR2）编码与甘油代谢相关的3-磷酸甘油酯酶系。其中，HOR2为渗透压调节型，在高渗透压的条件下有较大量的表达；而RHR2则为厌氧调节型，在缺氧的条件下有较多量的表达。因此，通过敲除HOR2或者RHR2（本研究选择敲除HOR2）基因在一定条件下可以阻断或者部分的阻断甘油代谢，从而减少甘油的产生，最终使更多的碳源用于转化生成乙醇，为酿酒酵母代谢调控打下一定的基础。　　 本论文通过设计含有与HOR2（GPP2）基因两侧序列同源的长引物，以质粒PUG6为模板进行PCR构建含有Cre/loxP系统的酿酒酵母HOR2基因敲除组件，转化酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）YS2，获得为loxP-kan-loxP序列组件所替换而产生kanr的阳性克隆子。然后再将质粒pSH65转入阳性克隆子诱导表达Cre酶切除筛选标记，在原ORF基因处保留一个loxP位点，丢失质粒后获得HOR2单倍体缺陷型菌株。重复转化敲除组件实现另一条等位基因的敲除。从而成功的获得了酿酒酵母HOR2基因缺失的突变株，并命名为YS2-HOR2。发酵实验表明，突变株甘油产量降低3.34％，乙醇产量提高1.96％。