PeNhaD1基因转化银灰杨及其悬浮细胞的耐盐性研究

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在高等植物体内,主要存在两种Na+/H+逆向转运蛋白,分别为位于细胞质膜上的逆向转运蛋白SOS1,以及存在于液泡膜上的AtNHX1。质膜Na+/H+逆向转运蛋白主要负责Na+的外排,液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白主要负责把Na+区隔化入液泡。过量表达质膜Na+/H+逆向转运蛋白SOS1或液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白AtNHX1能够明显提高植物的耐盐性。 从抗盐树种胡杨(Populus Euphratica)中克隆的Na+/H+逆向转运蛋白的编码基因PeNhaD1,相关的研究已经证明Na+/H+逆向转运蛋白在植物和细菌的耐盐性中起关键作用。本文将PeNhaD1基因转化到对盐敏感的树种银灰杨(Populus×canescens)中,为了进一步确定PeNhaD1的功能,一方面诱导转基因银灰杨愈伤组织,建立悬浮体系,在不同浓度的NaC1条件下盐胁迫16天,在处理过程中阶段性的取样并测定液体培养基的PH值、悬浮细胞的相对电导率以及悬浮细胞中多种元素的含量;另一方面对转基因银灰杨组培苗进行分化增殖和生根培养,并通过炼苗和移栽最终将其移入大田,测定苗木的叶片叶绿素含量、叶片含水量,且盐胁迫枝条后测定各生理生化参数,结果表明,Na+/H+逆向转运蛋白能起到一定的排钠耐盐的作用,PeNhaD1基因很可能在胡杨耐盐机制中起重要作用。 本研究中,在测定样品中元素种类及含量时,摸索出一种更为简便快捷的前处理方法。传统的前处理方法消煮法需要高浓度强酸,高温加热,而且消化时排放的废气又污染空气。近年来,盐酸浸提法以其简便易行的优势被人们越来越广泛的应用于多项研究中,但该方法处理温度比较高,且不便于同时处理很多个样品。本文以混酸消煮法为对照,用盐酸浸提法对同一种材料分别在不同时间、不同温度、振荡和静置条件下浸提,之后用全谱直读ICP发射光谱仪测定各样品中的离子含量,摸索出了盐酸浸提法更简便的浸提条件,建立了一种更加快速、简便、高通量的前处理方法,适用于高通量、高效率、高精准定量分析方法ICP的需要,使测定植物矿质元素含量的方法更加简便快速,为测定悬浮细胞中各元素含量提供了极大的帮助。
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