家蝇蛹凝集素对B细胞免疫调节活性的研究

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本文分析了家蝇蛹凝集素对B细胞免疫调节活性。凝集素是一类具有糖结合专一性,可以促使细胞凝集的非酶非抗体蛋白质,由于糖的结合专一性可以发生多种生物学作用。家蝇生活在杂菌横生的环境中,是多种疾病的传播者,而自身却不染病,这主要与家蝇的免疫防御作用密切相关。经过超滤浓缩、Sepharose4B亲和层析与DEAE离子交换法从家蝇蛹中分离纯化出分子量分别为38KDa,43KDa,56KDa和81KDa的四种凝集素,分别命名为MPL-1、MPL-2、MPL-3和MPL-4。凝血实验和B淋巴细胞的增殖活性实验说明MPL-3的凝血活性最高且对小鼠B淋巴细胞的增殖影响最为显著。利用高效液相色谱和SDS-PAGE对MPL-3的纯度进行检测,结果表明MPL-3是单一组分,希夫染色有红色蛋白条带出现,说明MPL-3含有糖链结构。苯酚-硫酸法测得其糖含量为2.72%,考马斯亮蓝(Brad for法)测得蛋白含量为97.2%。MPL-3可以刺激小鼠B淋巴细胞,促进B细胞的增殖活性,且与MPL-3的剂量成依赖关系。MPL-3可以刺激B淋巴细胞促进IL-6、IL-12和IFN-γ的表达,且表达量与MPL-3的剂量成依赖关系。蛋白免疫印迹结果显示:MPL-3激活了ERK1/2和NF-κB信号通路,随着MPL-3浓度的增加ERK1/2的磷酸化水平,NF-κB的活化水平与IκBα蛋白的降解水平亦不断增强,ERK1/2抑制剂PD98059可以影响NF-κB的活化水平,而NF-κB的抑制剂PDTC却对ERK1/2的磷酸化水平没有影响,说明NF-κB作为ERK1/2的下游受ERK1/2的调控。抑制ERK1/2和NF-κB信号通路发现,小鼠B淋巴细胞的增殖活性和IL-6、IL-12、IFN-γ的表达水平均有所下降,说明小鼠B淋巴细胞的增殖和细胞因子IL-6、IL-12和IFN-γ的产生与ERK1/2-NF-κB信号通路相关。综上所述,MPL-3可以激活小鼠B淋巴细胞,并通过ERK1/2-NF-κB信号通路对其进行免疫调节,为开发天然免疫增强剂提供了一定的参考依据。
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