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抗生素高产菌株的选育是抗生素生产工业化的一个重要前提,星形孢毒素不仅在医学上有重要的应用价值,而且在农业上也有很大的应用前景,具有重要的实用价值。本论文对星形孢毒素产生菌H4138进行了分类鉴定及诱变育种研究。其主要研究结果如下:
1.链霉菌H4138菌丝提取物浓缩后呈红褐色膏状物,有刺激性气味,对蜡状芽孢杆菌具有较强的抑制作用,因此选择蜡状芽孢杆菌作为链霉菌H4138的指示菌,进行星形孢毒素高产菌株的初步筛选。
2.通过对菌株H4138的形态特征、培养特性、生理生化性状、细胞壁化学组分分析和16SrDNA序列分析等多相分类研究方法,确定该菌株为链霉菌属(Streptomyces)金色类群(Aureus)的一个新种,命名为星形孢毒素链霉菌Streptomyces staurosporinces。
3.运用4种诱变因子处理链霉菌H4138的原始出发菌株,并对所得较高产菌株进行传代稳定性测定。结果表明,紫外光与亚硝酸钠、微波与亚硝酸钠的复合诱变所得菌株产毒素稳定,而紫外光与氯化锂、微波与氯化锂的复合诱变所得菌株产毒素较不稳定。各诱变处理的最佳剂量分别是紫外光(15W,照射距离30cm)60s、紫外光照射50s与0.2M亚硝酸钠复合、紫外光照射40s与O.1M氯化锂复合、微波处理25s与0.1M的亚硝酸钠复合、微波处理30s与0.15M氯化锂复合。
4.经多次诱变,紫外光单独诱变60s筛选得到一株较高产菌株,编号为ZW001;紫外光照射50s与0.2M亚硝酸钠复合诱变得到两株较高产菌株,分别编号为ZY002与ZY003;紫外光照射40s与0.1M氯化锂复合诱变得到菌株ZL004;微波处理25s与0.1M的亚硝酸钠复合诱变得到菌株WY005;微波处理30s与0.15M氯化锂复合诱变得到菌株WL006。
5.以菌株ZY002为出发菌株,按照紫外光50s与0.2M亚硝酸钠组合、紫外光40s与0.1M氯化锂组合、微波25s与0.1M亚硝酸钠组合的顺序对菌株ZY002进行循环诱变,经多次诱变筛选得到一株高产菌株,编号为WZY007,高效液相色谱测定其星形孢毒素含量为820.06μg/mL,较出发菌株ZY002星形孢毒素含量提高了18.4%,较原出发菌株提高了140%;ZW001、ZY002、ZY003、ZL004、WY005和WL006星形孢毒素含量分别是374.2、693.4、649.6、557.8、570.2和487.2μg/mL,分别较原出发菌株(含量338.21μg/mL)提高了10.6%、110%、92.6%、64.9%、68.6%、44.1%。综合以上实验结果表明:紫外光、亚硝酸钠、微波及氯化锂对放线菌H4138是有效的诱变因子。
6.对菌株WZY007进行稳定性研究,结果表明:该菌株菌丝提取物在自然光照8h、紫外线照射2h及常温下贮存2个月等条件下,对蜡状芽孢杆菌的抑菌活性基本不变。
7.链霉菌H4138的发酵菌丝提取物有效成分对甜菜夜蛾有一定的杀虫作用,将链霉菌H4138的菌丝提取物与甲氨基阿维毒素苯甲酸盐混配,配制成2%星·甲乳油。毒力测定结果表明:H4138的提取物与甲氨基阿维毒素苯甲酸盐对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)2龄幼虫具有显著的增效作用。