[目的]　　 1、分离、培养小鼠骨髓间充质干细胞(mMSCs)，确保其良好的增殖能力和多向分化潜能，研究其生物学特征，并对相关生物学特性进行初步研究，为其后应用于动物模型做准备。　　 2、制备rAAV1-EGFP载体。观察其感染染小鼠骨髓间充质干细胞(mMSCs)及对mMSCs生物学特性的影响，并证实该病毒载体可高效转染mMSCs并获得高效稳定的体外表达，以符合体内实验要求　　 [方法]　　 1、冲洗小鼠长骨后，I型胶原酶消化长骨碎片，PBS洗净骨片后完全培养基接种骨片。静置3天，换液去除骨碎片及未贴壁细胞。后每3天换液。细胞融合度达70％-80%胰酶消化，按4×103/cm2密度接种培养。观察mMSCs生长特点、表面特异性标记、多向分化潜能的变化情况。　　 2、采用PEI转染法将三质粒pTR-EGFP，pXR-1，PXX680共转染293T细胞，包装rAAV1-EGFP，通过氯化铯密度梯度离心纯化获得rAAV1-EGFP;通过实时定量PCR检测病毒滴度。　　 3、采用不同滴度rAAV1-EGFP感染MSCs，需找合适的感染复数。观察转染后mMSCs生长特点、表面特异性标记、多向分化潜能的变化情况。观察rAAV1-EGFP转染对于mMSCs生物学特性的影响。　　 [结果]　　 1、收集小鼠骨片培养，经传代培养3代以上后细胞呈现为均质性较好的短梭形细胞。细胞汇合80%-90%时G0/G1期细胞百分率83.77%。P3-P6代细胞表面抗原高表达CD29、CD44、Sca-1，低表达CD45、CD31、CD34;P4代细胞经体外定向诱导培养，可分化为成骨及脂肪细胞，证实所培养细胞具备多向分化潜能。　　 2、通过实时定量PCR检测，获得高纯度的滴度为1.4×1011vg/ml的rAAV1-EGFP。　　 3、rAAV1-EGFP感染mMSCs最合适MOI值为105。流式细胞仪检测rAAV1-EGFP感染mMSCs48hGFP.的表达率为97.5%±0.5%。rAAV1-EGFP感染mMSCs后，mMSCs可正常贴壁，生长迅速，形态上无明显改变，其细胞表面特异性标记及多向分化潜能未受明显影响。　　 [结论]　　 1、通过骨片法成功分离、培养了正常C57BL/6小鼠的骨髓间充质干细胞，生物学特性稳定，可用于进行动物实验。　　 2、成功构建了重组腺相关病毒载体，并证实对其对mMSCs具有较高的转染效率并获得高效稳定的体外表达，rAAV1转染未明显影响mMSCS的生物学特性。