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本实验研究课题以人宫颈癌细胞株Hela为研究载体,将ADAM10干扰质粒转染进入Hela细胞中,通过筛选获得稳定转染的Hela细胞ADAM10基因沉默细胞系,从而研究Hela细胞ADAM10基因沉默前后细胞活性的改变。 目的:通过研究ADAM10基因沉默前后的Hela细胞活性的改变,找出ADAM10基因引起肿瘤细胞增殖,迁移的作用靶点与可能作用机制,为进一步的以ADAM10为核心的肿瘤治疗提供更多可靠依据。 方法:制备可供转染的高纯度环状干扰质粒;荧光显微镜观测转染效率;Real-time PCR检测ADAM10基因表达;Western blotting检测ADAM10蛋白表达水平;MTT法比较沉默前后Hela细胞增殖的变化;Transwell细胞侵袭实验;流式细胞计数法检测细胞周期变化;Real-time PCR检测CD44、CD44v6、CyclinA1;CyclinD1;Western blotting检测ERK、P-ERK。 结果:转染后得到ADAM10沉默细胞系,几乎不表达ADAM10蛋白;MTT法显示沉默前后细胞增殖有显著性差异;Transwell实验结果显示沉默前后细胞侵袭有显著性差异;流式细胞计数显示沉默ADAM10基因后Hela细胞发生G1期阻滞;沉默ADAM10基因后CD44基因表达无显著性差异,CD44v6基因表达下调,CyclinA1无显著性变化,CyclinD1表达下调;沉默ADAM10基因后Western blotting显示ERK表达无显著性差异,P-ERK表达下调。 结论: 1.Hela细胞中ADAM10蛋白表达水平可以影响CD44v6的基因表达 2.沉默ADAM10基因后细胞的侵袭性显著性降低,可能是通过 ADAM10蛋白表达水平影响CD44v6的基因表达。 3.沉默ADAM10基因后Hela细胞出现G1期阻滞,细胞增殖速率降低 4.沉默ADAM10基因后Hela细胞出现G1期阻滞,其机制可能与ADAM10调节细胞信号Ras通路,引起P-ERK表达下降有关。