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目的:脂肪干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSCs)是神经移植,治疗缺损神经的理想型细胞,但移植后死亡率高是亟待处理的难题。P2X7受体是神经系统疾病研究的热门靶点,已知P2X7受体能够拯救ATP诱发的ADSCs死亡,介导雪旺细胞向髓鞘型分化,促进髓鞘形成。本实验主要研究P2X7受体对脂肪干细胞是否具有促进其分化为雪旺样细胞的作用,对ADSCs分化后促神经再生功能的影响,为神经修复细胞疗法寻觅药物干预靶点提供理论根据。方法:取雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠腹股沟脂肪,Ⅰ型胶原酶消化法分离脂肪干细胞,培养传代,选用第三代细胞用于后续实验。用P2X7R(P2X7受体)慢病毒转染第三代未分化脂肪干细胞(uADSCs),构建uADSCs高表达P2X7R模型,Western blot验证P2X7R-uADSCs转染是否成功。MTT检测转染前后ADSCs增殖能力。将uADSCs和P2X7R-uADSCs以1×10~5/mL的密度种入六孔板中,加入1 mMβ-巯基乙醇培养24 h,再加入35 ng/mL全反式维甲酸,孵育72 h后,换取混合有5 ng/mL血小板衍生生长因子、10 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子、14μM forskolin和200 ng/mL heregulin的DMEM/F12新鲜培养基培养1-2 w诱导分化。RT-PCR检测神经营养因子BDNF、NRG-1和NT-3、神经营养因子受体TrkB和TrkC、髓磷脂相关蛋白P0和PMP22在dADSCs(分化型脂肪干细胞,differentiated ADSCs)和P2X7R-dADSCs中的mRNA水平。Western blot测定dADSCs和P2X7R-dADSCs中神经营养因子NT-3和NRG-1,神经营养因子受体TrkC和ErbB-4,髓鞘相关蛋白P0、MAG的表达量。结果:Ⅰ型胶原酶消化法提取原代ADSCs在DMEM/F12(含有10%的胎牛血清FBS,1%的青链霉素混合液)培养基中培养,细胞贴壁速度较快,4-5 h培养后就可见少量分散的细胞附着培养瓶底部。48 h后倒置显微镜下察看ADSCs细胞状态,细胞融合贴壁,形状多为短梭形、星形结构和不规则多边形结构。培养5-7 d后,ADSCs形态呈长梭形,细胞生长旺盛,传代后增长迅速;体外P2X7R慢病毒成功转染uADSCs,荧光显微镜下能够观察到持续的荧光,Western Blot检测结果显示uADSCs组和GFP-uADSCs组P2X7R表达明显低于P2X7R转染组;MTT检测数据分析显示,P2X7R病毒转染组细胞增殖能力与uADSCs组相比,无显著性差异;uADSCs和P2X7R-uADSCs在特定培养基中成功诱导分化为类雪旺细胞,细胞形态变成细长的纺锤形,且细胞呈螺旋状生长。RT-PCR检测显示神经营养因子BDNF、NRG-1和NT-3,神经营养因子受体TrkB和TrkC,髓鞘蛋白P0和PMP22在dADSCs和P2X7R-dADSCs中都有表达,且P2X7R-dADSCs组表达水平明显高于dADSCs组(P<0.05)。Western blot结果显示与dADSCs组相比,神经营养因子NT-3、NRG-1,神经营养因子受体TrkC和ErbB-4,髓鞘蛋白P0和MAG在P2X7R-dADSCs组的表达均显著升高(P<0.05)。结论:P2X7R对ADSCs增殖无显著作用,但可增强分化后ADSCs神经营养因子及相应受体和髓鞘蛋白的表达,有利于增强ADSCs促进髓鞘形成,修复神经功能。