【摘 要】
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目的:抗原处理相关转运体(transporter associated with antigen processing,TAP)属于ABC(ATP-binding cassette)超家族成员,由TAP1(75KDa)和TAP2(71KDa)形成异二聚体,负责抗
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目的:抗原处理相关转运体(transporter associated with antigen processing,TAP)属于ABC(ATP-binding cassette)超家族成员,由TAP1(75KDa)和TAP2(71KDa)形成异二聚体,负责抗原肽从胞浆到内质网的转运,在MHCⅠ类分子的抗原处理及提呈过程中发挥重要作用.TAP结构和功能障碍将导致细胞表面MHCⅠ类分子表达缺陷,这成为肿瘤细胞、病毒感染细胞逃逸免疫监视的重要机制.鉴于此,该实验利用RT-PCR技术获得人类抗原处理相关转运体亚基TAP2 cDNA片段,并构建其真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO-TAP2,为真核细胞表达TAP2分子以及进一步研究其功能奠定基础.方法:以EB病毒刺激的人类B淋巴母细胞系(B lymphoblastoid cell lines,B-LCLs)为实验材料,利用TRIzol试剂提取总RNA,将总RNA反转录为cDNA第一链.以cDNA为模板,根据人类TAP2基因的cDNA序列设计引物,扩增TAP2特异性片段.将TAP2 cDNA片段与表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO连接,构建重组真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO-TAP2,转化大肠杆菌TOP10,经过氨苄青霉素抗性筛选和PCR鉴定后进行测序分析.结果:经测序确认克隆得到的TAP2基因片段与GenBank登录的人类TAP2序列一致,已成功构建重组表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO-TAP2.结论:获得人类TAP2基因并构建了重组真核表达载体,对TAP2基因产物在肿瘤细胞系的表达、进一步研究TAP2分子在肿瘤基因治疗方面的作用具有重要的意义.
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