[目的]口腔扁平苔藓(Oral Lichen Planus,OLP)是常见的口腔黏膜慢性炎性疾病,其确切病因和发病机制尚未明确。长期存在的部分OLP可发生恶性转化,恶变为口腔癌,糜烂型OLP更易发生癌变。近年来,有研究认为微生物感染在其发病过程中起一定作用。本研究旨在对OLP患者病变组织的HPV感染情况、口腔中真菌微生物变化和血液内四种感染(梅毒、HIV、乙肝、丙肝)临床指标检出情况进行初步探讨,以分析这些因素与OLP之间的关系,预期成果或将有助于对OLP病因和机制的认识提供新思路。[方法](1)研究对象的收集:①OLP病变组织的收集:收集自2017年9月至2019年12月,初次到昆明医科大学附属延安医院口腔科就诊的临床表现和病变组织检查符合OLP患者的病理标本,根据其临床特征分为糜烂型(A组,9例)和非糜烂型(B组,15例)。同期收集年龄和性别基本与OLP组患者相匹配,在口外门诊拔牙术中获得的患牙周围正常无角化黏膜组织作为对照组(R组,20例);②唾液样本的收集:研究对象在取活检标本前,收集禁饮禁食2小时自然流出的全唾液5ml,液氮速冻保存备用;③血液样本的收集:收集同期至昆明医科大学附属延安医院口腔科门诊就诊临床诊断为OLP患者空腹外周静脉抗凝血5ml,送至检验科进行检测。(2)研究方法:①Envision免疫组织化学技术检测A、B、R组样本中p16INK4a蛋白的表达表达情况,巢氏PCR技术检测A、B、R组样本中HPV DNA的存在情况;②对A、B、R组患者唾液样本进行高通量真菌测序,分析OLP患者口腔真菌微生物的变化;③由检验科按临床检验流程,分别进行OLP患者血液中梅毒、HIV、乙肝和丙肝四种临床感染指标的检测。(3)统计分析:①根据p16INK4a阳性染色比例对其进行分类,计算阳性率;巢氏PCR检测并测序验证,采用SPSS19.0统计软件对最后结果进行卡方检验;②使用Qiime软件进行物种Alpha多样性及Beta多样性统计,使用SPSS19.0对OTU测序数、Alpha多样性指数及Beta多样性指数进行统计。两组服从正态分布的连续性变量进行比较时,采用独立样本T检验,三组或以上进行比较时采用单因素方差分析。PCA采用R软件作图,其余组间差异分析使用Graph-Prism 6软件作图;③统计患者血液中四种病原体感染指标的阳性率。所有统计结果均以P<0.05为差异具有统计学意义。[结果](1)Envision免疫组化技术检测p16INK4a蛋白结果:仅在1例糜烂型OLP病变组织中观察到细胞核和细胞质有明显的棕黄色着色,即p16INK4a阳性表达,其余组织均为阴性表达。经统计学分析,OLP组和R组、A组和B组之间蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。(2)巢氏PCR技术检测HPV及测序结果:仅1例糜烂型OLP组织扩增后经凝胶电泳出现目的条带,对该条带进行胶回收测序,经基因库比对,证实其为HPV 16型。经统计学分析,OLP组和R组、A组和B组HPV感染差异无统计学意义(P>0.05)。(3)OLP患者唾液真菌测序结果:相比R组,OLP组口腔真菌微生物Shannon指数降低,Simpson指数升高;PCA显示OLP组和R组样本距离较为接近;真菌丰度在各水平均呈现差异,子囊门和pullulancs陶氏菌丰度明显升高;在科和属水平上,各真菌丰度均明显降低。A组和B组比较,Shannon指数和Simpson指数无统计学差异,在门、科、属和种水平均有不同丰度的主要真菌微生物,但均无显著差异。(4)血液样本感染指标检测结果:TP和HIV均未检出,1例OLP样本存在HBV感染,检出率为2.13%,1例样本HCV OLP阳性,检出率为2.13%。[结论](1)通过Envision免疫组化技术对组织p16INK4a蛋白表达情况和巢氏PCR技术对样本HPV DNA存在情况进行检测,发现OLP与HPV/p16INK4a无关。(2)通过高通量测序,发现OLP患者唾液样本真菌菌群多样性较健康人群低,但其真菌群谱组成相似,念珠菌数量较正常人群减少。糜烂型和非糜烂型OLP 口腔主要真菌微生物组成和数量无差异。(3)通过分析OLP患者血液四种感染指标,发现OLP中TP和HIV未检出,HCV和HBV感染检出率也较低。